虫草素衍生物三乙酰基-3-羟基苯基腺苷对apoE-/-小鼠早期动脉粥样硬化病变影响的实验研究

摘要

目的:
　　 进行虫草素衍生物三乙酰基-3-羟基苯基腺苷(Triacetyl-3-hydroxyphenyladenosine,THPA)抗apoE-/-小鼠早期动脉粥样硬化的实验,探讨三乙酰基-3-羟基苯基腺苷对apoE-/-小鼠早期动脉粥样硬化病变的影响及其可能的作用机制。
　　 方法:
　　 本实验选用中国医学科学院实验动物研究所的51只雄性apoE-/-小鼠。5周龄时,将小鼠随机分成5组,模型对照组(n=11);辛伐他汀组(5mg/kg/d)(n=10);THPA治疗组(2.5,5,10mg/kg/d)(n=10,每组10只)。5组实验动物分别喂养促动脉粥样硬化的高脂饲料(15.8％脂肪和1.25％胆固醇,北京华阜康生物科技股份有限公司)、添加羧甲基纤维素钠(CarboxylmethylCellulose,CMC)、辛伐他汀或不同剂量的THPA共6周。CMC溶剂、辛伐他汀和不同剂量的THPA每天通过灌胃给予实验动物。治疗6周后,禁食12小时并麻醉,经内眦静脉取血,使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆中总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)等血清学指标。
　　 解剖并分离主动脉弓,油红O内膜染色,进行斑块面积评估。主动脉根部靠近心底的部位用于连续冰冻切片的制作,冰冻切片的厚度为8μm,切片开始的部位为主动脉根部主动脉瓣开始出现处,直至主动脉瓣膜完全消失。每只鼠平均收集45张切片,抽取其中5张(每间隔8张抽一张)用于油红O染色并进行亮绿复染,计算脂质染色阳性面积(μm2),用Image-ProPlussoftware6.0(MediaCybemetics)对斑块面积进行量化统计分析。心底主动脉根部剩余的40张切片用于免疫组化,检测病变部位炎症相关因子VCAM-1、TF、LOX-1、NF-κB的表达及与内皮保护相关的因子iNOS、eNOS的表达。所得全部数据分析采用SPSS13.0软件。
　　 结果:
　　 1、血脂:不同剂量的THPA治疗6周后和模型组相比血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的水平未有显著性变化。而血浆高密度脂蛋白胆固醇的水平在各剂量THPA治疗组较模型组均显著降低(p＜0.01)。
　　 2、主动脉弓内膜油红O染色:不同剂量的THPA治疗组均能显著抑制动脉粥样硬化斑块的形成,2,5、5.0和10mg/kgTHPA治疗组与模型组相比病变面积分别减少47％、45％和43％。
　　 3、心底主动脉瓣处冰冻切片油红O染色:与模型组相比,2.5、5.0和10mg/kg剂量的THPA均显著抑制主动脉瓣膜处动脉粥样硬化病变的形成,斑块面积分别减少40％、33％和35％。
　　 4、炎症相关因子:经THPA治疗后,THPA各治疗组炎症相关因子VCAM-1、TF、NF-KB、LOX-1的表达较模型组明显降低(P值均＜0.01),不同剂量THPA治疗组与辛伐他汀组以及THPA各治疗组之间炎症相关因子VCAM-1、TF、NF-κB、LOX-1表达无显著性差异(P值均＞0.05)。
　　 5、与内皮保护相关的因子(iNOS、eNOS):THPA各治疗组iNOS表达明显低于模型组(P值均＜0.01),THPA各治疗组eNOS表达明显高于模型组(P值均＜0.01),不同剂量THPA治疗组与辛伐他汀组以及THPA各治疗组之间iNOS、eNOS的表达无显著性差异(P值均＞0.05)。
　　 结论:
　　 1、THPA在apoE-/-模型鼠上可以有效减轻动脉粥样硬化病变的形成并通过影响病变形成过程中的多条途径发挥作用。
　　 2、THPA在apoE-/-小鼠早期动脉粥样硬化过程中其可能的药理作用机制是抑制炎症反应、保护血管内皮,从而对apoE-/-小鼠早期动脉粥样硬化有较好的治疗作用。
　　 3、我们的实验结果提供了THPA抗动脉粥样硬化功能新的认识,为THPA药物开发应用提供了科学依据。