人源M2三联体靶抗原的克隆表达及其在原发性胆汁性肝硬化中的应用

摘要

该研究设计克隆表达了一抗原蛋白三联体,命名为BPO,它包含了M2抗体识别的人源BCOADC-E2、PDC-E2、OGDC-E2的抗原表位片断.该研究工作共分三个部分：一、PBC特异性M2抗体靶抗原及其三联体的克隆表达与鉴定;从人外周血单个核细胞（PBMC）中抽提细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以此作为模板,PCR法扩增PDC-E2内侧硫辛酰区和部分外侧硫辛酰区,BCOADC-E2和OGDC-E2的硫辛酰区.扩增产物用相应限制性内切酶酶切后纯化,定向克隆入表达载体pQE-30.对插入载体的目的基因进行测序.二、PBC免疫学诊断方法的建立 我们将N端融合有六个组氨酸残基的重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析柱,在变性条件下进行纯化,然后透析除去变性剂,以使重组蛋白复性.利用纯化得到的BPO,建立了Westen-blot法与ELISA法.ELISA法的的批内、批间变异系数均小于10﹪.85例阴性对照血清的OD值为0.073±0.046.阳性临界值定为0.303（阴性平均OD值+5SD）.三、PBC免疫学诊断方法的临床应用 ELISA法检测体检者、肝病患者和自身免疫性疾病患者血清中的M2抗体.M2抗体阳性血清用Westen-blot法予以确认.

目录

缩略词表

前 言

第一部分原发性胆汁性肝硬化特异性M2抗体靶抗原的克隆表达与鉴定

材料与方法

结果

讨论

第二部分原发性胆汁性肝硬化免疫学诊断方法的建立

材料与方法

结果

讨论

第三部分原发性胆汁性肝硬化免疫学诊断方法的临床应用

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

文献综述

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致 谢