浅部致病真菌的分子生物学鉴定及药物敏感性的相关研究

摘要

该课题对浅部真菌病从临床标本的真菌学分析、病原真菌的分子生物学分类鉴定以及病原真菌的种株特异性与抗真菌药物敏感性等方面进行研究,以期为病原真菌的分离、鉴定提供指导,为浅部真菌病防治措施的制定提供一定的理论依据.材料与方法:1.浅部真菌病临床标本的真菌学分析;对97年9月至2000年9月该院门诊及住院病人送检的鳞屑、甲、毛发等1948份标本,就各个病种、各种标本的镜检及培养等方法的检出率,分离真菌的种类、分布等方面进行分析.统计结果进行X<'2>检验等处理.2.丝状真菌DNA抽提方法的研究:以红色毛癣菌和须癣毛癣菌为代表菌株,采用改良后的氯化苄法以及小量酵母DNA试剂盒(裂解酶+蛋白酶K)法抽提基因组DNA,并对两种方法的产量进行了比较.另外,对以改良氯化苄法抽提的DNA的品质及稳定性进行了研究.3.病原真菌的分子生物学分类鉴定:采用微小卫星引物及随机引物,对浅部真菌病常见病原菌:皮肤癣菌、非皮肤癣菌、酵母菌的基因组DNA进行扩增,对各病原菌DNA指纹的特征进行分析.4.病原真菌种株特异性与抗真菌药物敏感性研究:采用微量稀释法,对常见皮肤癣菌对7种抗真菌药物的敏感性与种株特异性关系进行了探讨.对最重要的浅部病原真菌—红色毛癣菌进行了种内基因分型,并就其基因型、表型、分离部位等与对抗真菌药物的敏感性进行了相关性研究.结论:1.浅部真菌病临床标本的真菌学分析:在临床标本的病原菌检测方面,镜检结合培养的阳性率显著高于单一的镜检或培养.除了手足癣以外,其它部位标本的直接镜检阳性率均显著高于培养的阳性率.2.丝状真菌DNA抽提方法的研究:研究表明,氯化苄法抽提丝状真菌的DNA得率和纯度均较高,而且稳定性好,存放于-20℃3年无降解,这为长时期的持续性研究工作提供了极为有利的条件.氯化苄法操作较为简便,费用不高,尤其推荐于产孢少、生长缓慢的丝状真菌DNA的抽提研究.3.病原真菌的分子生物学分类鉴定:应用同一种引物的PCR方法快速鉴定和区分大多数常见的皮肤癣菌、非皮肤癣菌、致病念珠菌以及常见酵母菌,已经成为可能.4.病原真菌种株特异性与抗真菌药物敏感性研究:皮肤癣菌MIC值判定应以第5-7天的测定值为准.不同的皮肤癣菌标准株对同一种抗真菌药物呈现出不同的MIC值,特比萘芬、萘替芬的MIC值最低,伊曲康唑次之,5-FC最高.二性霉素B的MIC值低于氟康唑,接近酮康唑与伊曲康唑.不同基因型、表型及不同部位分离的红色毛癣菌菌株对特比萘芬、萘替芬、伊曲康唑的MIC值范围较集中,且前二者的MIC值更小,而对酮康唑和氟康唑的MIC值范围则相差较大.现有的数据不能表明,红色毛癣菌对抗真菌药物MIC间的差异与基因型、表型的差异或分离部位的不同有关.

目录

英文缩写

前言

第一部分浅部真菌病临床标本的真菌学分析

第二部分丝状真菌DNA抽提方法的研究

第三部分浅部真菌病病原菌的分子生物学鉴定

I实验材料

II实验步骤与方法

Ⅲ结果

Ⅳ插图

Ⅴ讨论

I实验材料

II实验步骤与方法

Ⅲ结果

Ⅳ讨论

参考文献

附录

致谢

Review