新方法寻找未知趋化因子及其克隆与表达

摘要

第一部分:CCR5多克隆抗体拮抗小鼠肝纤维化的研究.背景和目的:趋化因子是一组参与免疫与炎症反应的前炎症蛋白,它通过趋化和激活白细胞在免疫与炎症反应中发挥重要作用.但是它们在疾病发展中的作用,特别是在肝纤维化中的作用还不清楚.在该实验中我们研究了CCR5在小鼠的肝纤维化中的作用.方法:首先在常规的大鼠模型的基础上,我们发展了一种猪血清所致的小鼠肝纤维化模型.利用这一模型我们研究了模型组和抗mCCR5抗体拮抗组在纤维化过程中ALT/HA水平的变化并用组化、免疫组化的方法研究了这其中组织形态损伤的差别.第二部分:新方法寻找未知趋化因子及其克隆与表达.背景和目的:通过计算机发现新基因是基因组计划以来的一大热点.趋化因子家族的基因来自于同一祖先,因而基因序列上同源性很高,且相关的趋化因子基因常常在染色体上聚集成簇,非常适合这种方法的应用.我们拟通过生物信息学的方法发现新的趋化因子基因.方法:根据CC趋化因子的基因特点,我们编制了一个程序用来对基因组进行搜索.找到的基因片段我们称为

目录

缩略词

试剂与仪器

第一部分 CCR5多克隆抗体拮抗小鼠肝纤维化的研究

前言

实验方法

一、小鼠肝纤维化模型的复制

二、通过测定HA/ALT水平临测纤维化程度

三、组化、免疫组化

实验结果

一、异种动物血清诱导的小鼠肝纤维化模型的复制

二、抗-CCR5-mAbs拮抗肝纤维化的结果

讨论

参考文献

第二部分新方法寻找未知趋化因子及其克隆与表达

前言

实验方法——生物信息学部分

一 实验设计

二 软件的编制

三 用BENSCAN。EXE搜索基因组序列

四 EST 步长延伸法确定全长表达序列

五 GENSCAN分析

六 序列同源性比较

实验部分

大鼠趋化因子CCL6的克隆

大鼠趋化因子CCL6的表达载体构建

大鼠趋化因子CCL6的表达蛋白的提取、纯化

实验结果1

一 BENSCAN。EXE的源代码

二 用BENSCAN。EXE搜索基因组序列

三 EST步和延伸法确定全长表达序列

四 GENSCAN分析

五 序列同源性比较

实验结果2 大鼠趋化因子CCL6的克隆

一、PCR扩增目的片断

二、rat-CCL6/pMD18-T质粒构建酶切鉴定及测序分析

实验结果3 大鼠趋化因子CCL6的表达载体构建

一、PCR扩增蛋白编码区序列

二、rat-CCL6/pMD18-T质粒2构建酶切鉴定分析

三、工程菌的筛选

四、诱导时间的确定

五、GST-Rat-CCL6融合蛋白的提取分离

六、GST-Rat-CCL6融合蛋白的纯化

八、Rat-CCL6的纯化

讨论

参考文献

综述

致谢

附件