腺病毒介导的反义CⅡTA基因转移对实验性自身免疫性心肌炎的防治

摘要

该研究设计以小鼠pⅣ型CⅡTA mRNA为模板的反义片段,片段全长为431bp,覆盖了起始密码子上游22个碱基及阅读框5'端409个碱基,也包含了第一外显子和第二外显子间的剪接位点;用常规分子生物学方法构建了反义片段的腺病毒表达载体(pAdEasy-1系统);腺病毒载体经HEK293细胞包装产生含反义片段的重组腺病毒Ad-CⅡTA,用氯化铯密度梯度离心法获得纯化的高滴度腺病毒;采用多种方法对重组腺病毒进行了定量检测与活性评价;并将Ad-CⅡTA分别感染Hela细胞与P388D1细胞,观察其对诱导型与组成型MHC-Ⅱ类分子表达的抑制;用纯化的猪心肌肌凝蛋白免疫Balb/c小鼠,诱导实验性自身免疫性心肌炎动物模型的产生,并分别于免疫后0~2天与14~16天经尾静脉注射重组腺病毒,观察Ad-CⅡTA对实验性自身免疫性心肌炎的预防与治疗效果.第一部分,携带小鼠MHC-Ⅱ类分子反式作用因子基因反义片段的重组腺病毒载体的构建;第二部分,重组腺病毒的纯化与定量检测;第三部分,腺病毒介导反义CⅡTA基因转移抑制MHC-Ⅱ类分子表达的体外研究;第四部分,重组腺病毒Ad-CⅡTA介导基因转移对实验性自身免疫性心肌炎的防治.在该研究中,我们使用的Ad-CⅡTA在不同病理时期对EAM进行治疗均取得了较好的效果,这为临床治疗自身免疫性心肌炎提供了有意义的启示,因为EAM与人类心肌炎的病理过程十分相似.但是我们也注意到,人类心肌炎大多由嗜心性病毒引起,目前认为病毒并非是造成心肌炎病理损伤的直接原因,一过性的病毒感染导致受染心肌细胞释放肌凝蛋白等自身抗原,触发自身免疫反应,导致更为严重的心肌细胞损伤.因此,心肌炎实质上是一种自身免疫功能失常,机体各种免疫细胞参与的自身免疫性疾病.尽管该疾病的急性阶段与EAM相异,位慢性活动性阶段的免疫损伤却与EAM殊途回归.因此,我们认为Ad-CⅡTA对嗜心性病毒感染导致的心肌自身免疫损伤也具有一定的治疗作用,可以通过进一步的实验来证实.

目录

英文缩写词表

前言

第一部分：携带小鼠MHC-Ⅱ类分子反式作用因子基因反义片段的腺病毒载体的构建

第二部分：重组腺病毒的纯化与定量检测

第三部分：腺病毒介导反义CⅡTA基因转移抑制MHC-Ⅱ类分子表达的体外研究

第四部分：腺病毒介导反义C ⅡTA基因转移对实验性自身免疫性心肌炎的防治

材料和仪器

方法

结果

讨论

参考文献

小结

致谢

综述：基因治疗自身免疫性疾病的研究进展

附录：在读期间发表论文