食蟹猴同种异体肾移植模型的建立及其抗排斥研究

摘要

免疫耐受是器官移植研究的终极目标.深入研究免疫耐受机理、探讨临床适用的耐受诱导方案及评估生物制品类抗排斥药物的安全性和有效性,均需要建立非人灵长类同种器官移植模型.目前国内尚未见有关建立此类模型或采用此类模型进行研究的报道.我们采用中国广西食蟹猴成功建立了同种肾脏移植模型;并采用PCR-SSP法进行了DRB分型,为供受者动物的合理选择和未来耐受诱导结果的分析打下了基础.我们还在成功建立食蟹猴同种肾移植模型的基础上,观察了中国自行研制的人源化抗CD25单抗抗移植物排斥的有效性.抗CD25治疗明显延长了移植物的存活时间,未出现明显副作用;其可能通过阻断IL-2与受体结合发挥抗排斥作用.该研究为中国自行研制的人源化抗CD25单抗进入临床奠定了实验基础.

目录

前言

第一部分：中国食蟹猴同种肾移植模型的建立

1.1材料

1.1.1实验动物

1.1.2主要试剂与药物

1.1.3主要液体配制

1.1.4主要仪器设备

1.2方法

1.2.1红细胞的分离

1.2.2外周血单个核细胞的分离

1.2.3 ABO血型检测

1.2.4补体交叉反应

1.2.5猴基因组DNA提取

1.2.6 MHCⅡ类分子分型

1.2.7混合淋巴细胞反应

1.2.8红细胞表面CD52抗原的检测

1.2.9肾脏移植手术

1.2.10动物观察和随访

1.2.11外周血淋巴细胞表型分析

1.2.12病理学检测

1.3.结果

1.3.1 ABO血型检测

1.3.2 MHC Ⅱ类分子分型

1.3.3补体交叉反应

1.3.4混合淋巴细胞培养

1.3.5术后存活

1.3.6移植动物的肾功能变化

1.3.7肾移植后血常规变化

1.3.8肾移植后外周血淋巴细胞亚群变化

1.3.9移植动物的一般状况

1.3.10病理学检测

1.3.11食蟹猴红细胞CD52样抗原分子的表达

1.4.讨论

1.4.1中国食蟹猴同种肾脏移植模型的建立

1.4.2 MHC Ⅱ DRB分型研究

1.4.3 ABO血型检测

1.4.4食蟹猴红细胞CD52样抗原分子的表达

第二部分：人源化抗CD25单克隆抗体抗肾移植排斥研究

2.1材料

2．1．1实验动物．

2.1.2主要试剂与药物

2.1.3细胞株

2.1.4主要液体配制

2.1.5主要仪器设备

2.2方法

2.2.1肾脏移植及给药方案

2.2.2血药浓度检测

2.2.3外周血单个核细胞的分离

2.2.4抗抗体检测

2.2.5 ADCC

2.2.6补体杀伤实验(CDC)

2.2.7竞争抑制实验

2.2.8病理学检查

2.2.9统计学处理

2.3结果

2.3.1人源化抗CD25单抗治疗同种猴肾移植的有效性研究

2.3.2抗体血药浓度及免疫原性

2.3.3人源化抗CD25的体内、体外作用研究

2.4讨论

总结

参考文献

综述

综述一：非人灵长类动物在器官移植研究中的应用

参考文献

综述二：抗IL-2受体抗体的研制及其在器官移植中的应用

参考文献

致谢