罗非昔布调节血管内皮生长因子和诱导型一氧化氮合酶干预胃癌血管生成的实验研究

摘要

近年来，多种资料表明，非细胞毒药物不仅可抑制胃癌的生长甚至转移，而且不良反应较轻，能明显延长患者生存期，提高生存质量。这其中包括生长因子、激素及环氧合酶-2抑制剂等。 多项研究发现环氧合酶-2(Cox-2)与人类肿瘤密切相关，包括结直肠癌、胃癌、胰腺癌、肺癌等多种人类恶性肿瘤其Cox-2的表达均明显增高。许多动物模型及基因研究结果显示Cox-2的确在肿瘤的发生、发展过程中起重要作用。 研究显示，Cox-2的表达在胃腺癌中明显上升，Cox-2的过度表达能促进肿瘤的新生血管生成，为肿瘤生长和转移提供所必需的营养。Cox-2在肿瘤和内皮细胞形成过程中起重要作用，增加多种肿瘤细胞微环境内Cox-2的表达可以影响肿瘤的血管形成。由于胃癌组织和多个胃癌细胞系有Cox-2的高表达而抑制Cox-2的活性可使胃癌细胞的增殖受抑，因此，Cox-2抑制剂与胃癌的关系越来越受到重视。 肿瘤血管生成是一个由局部微环境、癌基因与抑癌基因等因素共同参与，最后通过影响血管生成正负因子之间平衡状态进行调节的复杂病理生理过程。在肿瘤组织中，肿瘤细胞和宿主细胞分泌多种细胞因子，生成一个有利于血管生成的微环境。现有研究结果表明，在不同肿瘤组织中，参与血管生成调节的因子可能存在差异，而在胃肠道肿瘤，VEGF则为刺激血管生成的主要因子。 对VEGF的研究表明，VEGF可诱导血管内皮细胞合成一氧化氮，一氧化氮作为重要的血管扩张剂，在VEGF促血管内皮细胞和肿瘤细胞增殖中起关键的作用，可刺激VEGF产生，并参与VEGF促血管生成过程中的每一步骤，同时一氧化氮还是一个肿瘤血管形成调节因子，可通过一系列作用机制促进肿瘤血管生成。 目的 1.探讨环氧合酶-2抑制剂罗非昔布对人胃癌SGC-7901裸鼠原位种植瘤生长和转移的影响。 2.探讨罗非昔布对裸鼠人胃癌组织中MVD、VEGF、iNOS表达的影响。 3.探讨罗非昔布对裸鼠人胃癌组织中VEGFmRNA、iNOSmRNA表达的影响。 方法 1.建立裸鼠人胃癌原位种植转移模型，观察裸鼠全身情况、腹部体征，待荷瘤鼠濒临衰竭时处死，收集裸鼠体内脏器作HE染色，检测生长转移情况，以此鉴定转移模型建立的成功与否；选取原位瘤体及转移灶组织作染色体检测以鉴定肿瘤的来源。 2.建立裸鼠人胃癌原位种植转移模型，用罗非昔布给裸鼠口服，观察罗非昔布对原位种植瘤瘤重及抑瘤率的影响，以鉴定罗非昔布对胃癌细胞增殖的抑制作用；了解肝脏及腹水等转移情况，以鉴定罗非昔布对胃癌细胞转移的抑制作用。 3.通过免疫组化EnVision法检测胃癌组织中的MVD、VEGF、iNOS蛋白的表达；运用RT-PCR方法从分子水平上半定量检测胃癌组织中VEGFmRNA、iNOSmRNA的表达，以观察罗非昔布对VEGF、iNOS表达的影响。 结果 1.成功建立裸鼠人胃癌原位种植转移模型，HE染色证实为胃低分化腺癌，染色体检测确定肿瘤来源人类胃癌。移植瘤原位成瘤率100％。 2.生理盐水组的肿瘤瘤重为2.24g±0.69g，5-Fu组的肿瘤瘤重为1.15g±0.47g，抑瘤率为48.8％，罗非昔布组的肿瘤瘤重为1.32g±0.48g，抑瘤率为41.2％，联合组的肿瘤瘤重为0.57g±0.35g，抑瘤率为74.4％。各治疗组肿瘤瘤重与生理盐水组相比，差异有显著性(P＜0.05)；罗非昔布组肿瘤瘤重与5-Fu组相比，差异无显著性(P＞0.05)；联合组肿瘤瘤重与5-Fu组、罗非昔布组相比，差异有显著性(P＜0.05)。罗非昔布组肝转移率及腹水形成率亦较对照组降低。 3.免疫组化方法检测显示MVD计数结果显示： 对照组为56.8±9.8，化疗组为39.9±7.0，罗非昔布组为42.3±11.0，联合组为25.1±7.6。各治疗组MVD与对照组相比，差异有显著性(P＜0.05)；化疗组和罗非昔布组MVD与联合组相比，差异有显著性(P＜0.05)；罗非昔布组MVD与化疗组相比，差异无显著性(P＞0.05)。 VEGF的表达为：对照组VEGF阳性率为81.25％，化疗组VEGF阳性率为58.75％，罗非昔布组VEGF阳性率为61.25％，联合组VEGF阳性率为35.00％，各治疗组VEGF阳性表达率与对照组相比，差异均有显著性(P＜0.05)，罗非昔布组VEGF阳性表达率与化疗组相比，差异无显著性(P＞0.05)，联合组VEGF阳性表达率与化疗组，罗非昔布组相比，差异有显著性(P＜0.05)。 iNOS的表达显示：对照组iNOS阳性率为73.75％，化疗组iNOS阳性率为50.00％，罗非昔布组iNOS阳性率为52.50％，联合组iNOS阳性率为26.67％，各治疗组iNOS阳性表达率与对照组相比，差异均有显著性(P＜0.05)；罗非昔布组和化疗组iNOS阳性表达率与联合组相比，差异均有显著性(P＜0.05)；化疗组iNOS阳性表达率与罗非昔布组相比，差异无显著性(P＞0.05)。 4.RT-PCR方法检测显示VEGFmRNA的相对表达量为： 1)VEGF121mRNA相对表达量为：对照组为0.618±0.0295，化疗组为0.561±0.0230，罗非昔布组为0.580±0.0293，联合组为0.448±0.0234； 2)VEGF165mRNA相对表达量为：对照组为0.675±0.0192，化疗组为0.607±0.0251，罗非昔布组为0.629±0.0178，联合组为0.530±0.0217。化疗组、罗非昔布组和联合组VEGFmRNA表达与对照组相比，差异均有显著性(P＜0.05)；罗非昔布组VEGFmRNA表达与化疗组表达相比，差异无显著性(P＞0.05)；联合组VEGFmRNA表达与化疗组、罗非昔布组相比，差异有显著性(P＜0.05)。 iNOSmRNA的相对表达量为： 对照组为0.443±0.0329，化疗组为0.395±0.0212，罗非昔布组为0.408±0.0224，联合组为0.339±0.0282；化疗组、罗非昔布组和联合组iNOSmRNA表达与对照组相比，差异均有显著性(P＜0.05)：罗非昔布组iNOSmRNA表达与化疗组表达相比，差异无显著性(P＞0.05)；联合组iNOSmRNA表达与化疗组、罗非昔布组相比，差异有显著性(P＜0.05)。 结论 环氧合酶-2抑制剂罗非昔布可以通过降低胃癌肿瘤组织中VEGF、iNOS的表达，使肿瘤血管生成受抑，从而抑制胃癌细胞的生长和转移。

目录

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中英文对照

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英文详细摘要

前言

第一部分人胃癌SGC-7901裸鼠原位种植转移模型的建立

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分罗非昔布对人胃癌SGC-7901裸鼠原位种植瘤生长和转移的影响

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分罗非昔布对裸鼠人胃癌组织中MVD、VEGF、iNOS表达的影响

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第四部分罗非昔布对裸鼠人胃癌组织中VEGFmRNA、iNOSmRNA表达的影响

一、实验材料

二、引物序列

三、实验方法

四、统计处理

五、实验结果

讨论

参考文献

第五部分结论

第六部分附图

第七部分综述 胃癌与环氧合酶-2相关的研究现状

第八部分附录

第九部分致谢