乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失突变体对肝癌细胞生物学行为的影响及其机制的研究

摘要

本课题的目的在于研究和探讨乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失突变体对细胞生物学行为的影响及其机制。，因此，本研究采用了免疫组化、PCR扩增直接测序的方法，证实HCC癌组织中HBx的状态是以其蛋白的高表达和羧基端缺失突变为主；为此构建了HBx羧基端缺失突变质粒，观察其对转染肝癌细胞的生物学活性影响，证实HBx羧基端不同区域的功能具有明显的差异在细胞的增殖和侵袭方面；利用蛋白印迹的方法，证实这种差异涉及p53信号途径；通过cDNA芯片和双向凝胶电泳技术的运用，首次对HBx突变体从基因和蛋白质组水平进行研究，初步探讨了HBx羧基端30aa和40aa缺失导致HCC细胞生物学改变的分子基础和差异基因与蛋白质的表达，为进一步阐明HBx的致癌机制具有重要的理论意义。文章首先通过免疫组化和PCR产物扩增直接测序的方法了解了HBx基因和蛋白在HCC组织内的表达状态，然后基于第一部分的研究，为了进一步了解HBx羧基端的功能，系统构建了HBx羧基端分别缺失了10、20、30、40以及中间37个氨基酸的5个突变体与野生型HBx质粒，通过转染研究了其对Huh7肝癌细胞的生物学行为的影响。随后，研究采用蛋白印迹的方法，观察了HBx和HBx突变体对p53及其上、下游基因的影响。在第二部分的研究工作中，我们观察到HBx羧基端分别缺失了30aa和40aa的突变体，对Huh7细胞的增殖和侵袭具有完全不同的生物学效应。

目录

资助

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摘要

英文缩写词表

前言

第一部分HBV感染相关肝癌组织中HBx基因与表达产物的检测

一材料与方法

二结果

三讨论

参考文献

第二部分HBx及HBx羧基末端缺失对Huh7肝癌细胞生物学行为的影响

一材料与方法

二结果1

二结果2

三讨论

参考文献

第三部分HBx羧基端30和40个氨基酸缺失转染Huh7细胞的基因表达谱和蛋白质组差异分析

一HBx突变体转染细胞的差异基因表达谱分析

（一）材料与方法

（二）结果

（三）讨论

二HBx突变体转染细胞的差异蛋白质组分析

（二）材料与方法

（二）结果

（三）讨论

参考文献

附录

全文总结

乙型肝炎病毒X基因突变研究现状

致谢

博士学位期间发表的文章