SARS冠状病毒刺突糖蛋白的RNA干扰研究

摘要

本研究中，笔者针对SARS-CoVS蛋白氨基端设计并用T7RiboMAXTM表达系统体外转录合成了两段S基因特异的siRNA,并选用EGFP-siRNA和无关siRNA(scramblesiRNA)分别作为阳性和阴性对照，结果证明了这两段siRNA均能有效且特异地抑制S蛋白的表达。 本实验以EGFP融合蛋白为报告基因，将含野生型和部分密码子优化的SARS-CoVS基因的真核表达质粒pEGFP-S和pEGFP-optS在HEK293T细胞中进行表达，蛋白免疫印迹实验结果显示，虽然二种质粒在细胞中均可表达，但表达水平存在明显差异；S蛋白的高水平表达为后续的RNA干扰实验奠定了基础。本实验针对SARS-CoVS蛋白氨基端设计并用T7RiboMAXTM表达系统体外转录合成了两段S基因特异的siRNA，并选用EGFP-siRNA和无关siRNA作为阳性和阴性对照，结果证明这两段siRNA均能有效且特异地抑制S蛋白的表达。

目录

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英文缩略词表

摘要

前言

第一部分SARS-CoV刺突糖蛋白(Spike)在HEK 293T细胞中的表达

材料（Materials）

方法(Methods)

结果(Results)

讨论(Discussions)

第二部分小干扰RNA对SARS-CoVS基因在细胞中表达的抑制

材料(Materials)

方法(Methods)

结果(Results)

讨论(Discussions)

总结

参考文献

综述SARS冠状病毒的分子生物学

致谢

附录