人乳头状瘤病毒16E7在人喉癌细胞系中的转染及表达

摘要

[目的]克隆HPV16E7-HSP70基因，提取该融合蛋白。研究HPV16E7基因对喉癌细胞的影响。[方法]构建HPV16E7-HSP70基因原核表达质粒，重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)表达，纯化复性目的蛋白；扩增出HPV16E7基因全长序列，将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)中。用电穿孔法将重组体pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7转染入喉癌HEp-2细胞中，观察其表达情况。[结果]HPV16E7-HSP70融合基因可以在原核细菌中正确表达。HEp-2细胞能够稳定表达HPV16E7蛋白。流式细胞仪检测转染后细胞增生活跃，S期明显延长。[结论]成功获得HPV16E7-HSP70融合蛋白；成功构建鉴定了载体pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7；HPV16E7有促进HEp-2细胞的致瘤活性。

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摘要

前 言

第一部分HPV16E7-HSP70融合基因原核表达质粒的构建和鉴定

第二部分HPV16E7-HSP70融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及复性

第三部分人乳头状瘤病毒16E7真核表达载体构建、鉴定及转染

小 结

致谢

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