Toll样受体4在肺型氧中毒中的表达及其机制研究

摘要

本课题拟解决以下三个问题：1、小鼠230kPa纯氧暴露不同时程，小鼠肺组织损伤特点；2、观察小鼠230kPa暴露不同时程后肺组织TLR4表达变化；3、初步探讨TLR4在肺型氧中毒中的作用。 第一部分230kPa纯氧暴露不同时程小鼠肺组织损伤特点研究 方法:1、雄性C57BL/6小鼠，体重20克左右，58只随机分为对照组、230kPa纯氧暴露2、6、10小时组和230kPa常氧高压氮组。2、动物出舱后进行行为学观察；肺组织经固定后石蜡包埋，切片，HE染色显微镜下观察；计算肺湿干重比=肺湿重/肺干重；取BALF，BCA法测量总蛋白浓度。3、实验结果以均数±标准差表示。采用SPSS13.0软件包，均数间比较进行One-WayANOVA。检验水准α=0.05。 结果:1、纯氧暴露2、6、10小时动物出舱后出现不同程度的活动减少，反应迟钝，呼吸急促等现象，但是在对照组、抗体组和常氧高压氮组动物活动均较活泼，无行动迟缓、呼吸急促等现象。各组动物均未出现肢体颤抖及死亡现象。2、6小时暴露组肺组织出现肺萎陷、出血、白细胞在肺问质大量聚集等现象，在10小时暴露组还观察到明显的肺泡扩张、支气管分泌物增多、及肺泡上皮脱落等现象。2小时暴露组、对照组、常氧高压氮组和抗体组炎细胞浸润不明显。 以上结果表明已经成功造成肺型氧中毒。3、肺湿干重比结果显示暴露2小时组比对照组有显著增高(P＜0.01)，6小时组与2小时组相比没有显著改变，但仍比对照组有显著增高(P＜0.05)，10小时组肺湿干重比达到最高，与其他二组相比改变均有显著性(P＜0.01)。4、BALF总蛋白含量2小时和6小时与对照组相比差异没有显著性，10小时组与对照组相比显著增高(P＜0.05)。 第二部分230kPa纯氧暴露不同时程小鼠肺组织TLR4表达改变 方法:1、雄性C57BL/6小鼠，体重20克左右，30只随机分为对照组、230kPa纯氧暴露2、6、10小时组和230kPa常氧高压氮组。2、动物出舱后，麻醉取肺组织。一部分应用液氮速冻，在液氮下研磨匀浆，Trizol法抽提肺组织RNA，反转录cDNA，实时荧光定量PCR，观察肺组织TLR4mRNA转录变化；另外一部分肺用10％中型缓冲福尔马林固定6～24小时，然后脱水、浸蜡、切片，用Envision法免疫组化观察肺组织TLR4蛋白表达情况。3、实验结果以均数±标准差表示。采用SPSS13.0软件包，均数间比较进行One-Way ANOVA。检验水准α=0.05。 结果:1、免疫组化：随着暴露时间的延长，小鼠肺组织TLR4蛋白表达量逐渐减少，10小时暴露达到最少。常氧高压氮组肺组织表达TLR4与对照组相比没有显著性变化2、实时荧光定量PCR：2小时组TLR4mRNA转录比对照组就有显著的降低(P＜0.01)，6小时组进一步降低(P＜0.01)，10小时组转录最低(P＜0.01)，各组间比较差异均有显著性。但是常氧高压氮暴露组的TLR4mRNA与对照组相比没有显著性改变。 结论:1、随着高分压氧气(230kPa)暴露时间的延长，小鼠肺组织病变逐渐加重。而仅仅是压力增加，氧气分压不变，不能对肺组织造成损伤。2、随着高分压氧气暴露时间的延长，小鼠肺组织损伤的加重，肺组织TLR4在核酸转录水平和蛋白表达水平降低。3、以上结果表明TLR4可能参与到肺型氧中毒的发病过程中，其在肺型氧中毒中的作用机制还需要进一步深入的研究。

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前 言

第一部分230kPa纯氧暴露不同时程小鼠肺组织损伤特点研究

材料与方法

结果

讨论

第二部分230kPa纯氧暴露不同时程小鼠肺组织TLR4表达改变

材料与方法

结果

讨论

全文总结

参考文献

Bcl-2家族蛋白与肺型氧中毒 综述

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