羟基乙酸用于肝癌瘤内注射的药效及脂质体制剂研究

摘要

经皮肝癌瘤内注射药物是治疗肝癌的一种重要手段，乙酸是目前应用的疗效突出的肝癌瘤内注射治疗药物。但是经皮乙酸注射在治疗肝癌的过程中仍存在着对肿瘤的渗透能力有限，难以制成缓释制剂，注射过程中引起患者疼痛的局限性。为了克服这一缺点，本文将羟基乙酸作为一种高效的化学灭活剂引入到经皮瘤内注射治疗肝癌中，通过对肿瘤细胞的体外抑制、大鼠的肝坏死及裸鼠移植性肝癌的治疗研究，证实羟基乙酸具有很强的抑制肿瘤作用。同时，将羟基乙酸做成脂质体，并制备了壳聚糖修饰的脂质体，考察了包封率及体外释放，并研究了羟基乙酸脂质体制剂对裸鼠移植性肿瘤的治疗作用。 在羟基乙酸溶液的药效考察中，制备了不同浓度的羟基乙酸溶液，进行了细胞、大鼠和裸鼠实验，并将其与同浓度的乙酸的药效进行比较。通过细胞实验，发现羟基乙酸对肝肿瘤细胞有较强的抑制作用；通过大鼠的肝损伤实验，发现与同浓度的乙酸相比，羟基乙酸导致大鼠肝脏坏死的最大横截面的平均直径更大(P＜0.05)；通过裸鼠移植性肿瘤的治疗实验，经皮瘤内注射羟基乙酸后裸鼠的平均直径较同浓度的乙酸小(P＜0.05)，同时光镜以及电镜也进一步证实了羟基乙酸更强的抑制肿瘤作用。 在本文中，确定了羟基乙酸的含量测定方法。采用离子对反相色谱法，在210 nm下检测，以包含0.002 M四丁基碘化铵的0.025 M磷酸盐缓冲液(pH6.2)：甲醇(98：2)作为流动相，确定羟基乙酸标准曲线为Y=10878+408X，r=0.998，在0.3 mg/ml～30mg/ml范围内，羟基乙酸峰面积与浓度线性关系良好。采用逆相蒸发法制备了羟基乙酸脂质体，并通过单因素考察和正交试验优化了羟基乙酸脂质体的处方工艺，并对优选处方的粒径、包封率及体外释放进行了考察。结果粒径在1～5μm范围内。所制得的最优处方和工艺的药脂比(w/w)为3：5，磷脂与胆固醇的比例(w/w)为2：1，水相与有机相之比(v/v)为1：5，水浴温度为45℃，包封率为(38.6±1.4)％，在8h内可缓慢释放。 同时制备了壳聚糖修饰的羟基乙酸脂质体(壳聚糖包衣的羟基乙酸脂质体和载有壳聚糖的羟基乙酸脂质体)，考察其形态、粒径、Zeta电位、包封率和体外释放。体外释药结果经壳聚糖修饰的脂质体比未经修饰的脂质体有更好的缓释作用。 在羟基乙酸脂质体制剂在裸鼠移植性肿瘤的治疗作用考察中，30％乙酸组、30％羟基乙酸组、羟基乙酸脂质体组及壳聚糖修饰的羟基乙酸脂质体组均为每7天注射1次，每次注射0.15ml，共注射2次。结果由裸鼠肿瘤的平均直径和病理切片结果可知羟基乙酸脂质体组及壳聚糖修饰的羟基乙酸脂质体组比羟基乙酸溶液组及乙酸组药效更强，且达到了更好的延长治疗周期的作用。同时经壳聚糖修饰的脂质体组药效要强于未经修饰的脂质体组。 综上，羟基乙酸对肝肿瘤具有很强的抑制作用。与乙酸相比，羟基乙酸的体内外抗肿瘤效果显著。羟基乙酸脂质体及壳聚糖修饰的羟基乙酸脂质体对裸鼠移植性肝癌具有明确疗效，并与乙酸相比药效更强，且有可延长治疗周期的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分羟基乙酸用于肝癌瘤内注射的药效学研究

一、材料

二、方法与结果

(一)羟基乙酸对人肝肿瘤细胞的体外抑制作用

(二)羟基乙酸对大鼠肝脏的坏死作用

(三)羟基乙酸对裸鼠移植瘤的抑制作用

三、讨论与小结

第二部分羟基乙酸脂质体的制备及体外释药的考察

一、材料和仪器

二、方法与结果

(一)羟基乙酸脂质体的制备

(二)脂质体处方工艺的筛选与评价

(三)羟基乙酸脂质体的体外释药考察

三、讨论与小结

第三部分壳聚糖修饰的羟基乙酸脂质体的制备及体外释药的考察

一、材料和仪器

二、方法与结果

(一)壳聚糖修饰的羟基乙酸脂质体的制备

(二)壳聚糖修饰的羟基乙酸脂质体处方工艺的筛选与评价

(三)壳聚糖修饰的羟基乙酸脂质体的体外释药考察

三、讨论与小结

第四部分羟基乙酸脂质体及壳聚糖修饰的羟基乙酸脂质体用于肝癌瘤内注射的药效学研究

一、材料

二、方法与结果

(一)方法

(二)结果

三、讨论与小结

全文小结

参考文献

文献综述：经皮瘤内药物注射治疗肝癌的研究进展

在读期间文章发表和申请专利情况：

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