带CNTF及GDNF的神经导管桥接大鼠面神经总干对神经的诱向再生作用

摘要

面神经吻合后常常产生联带运动，这种现象是因为面神经再生过程中不同功能的神经纤维错向再生所致。为了改善面神经修复的效果，人们进行了很多研究，利用营养因子改善神经再生微环境、利用神经导管引导再生方向是两条重要的途径。
　　 神经营养因子是由神经靶组织、神经胶质细胞等神经微环境产生的一些多肽或蛋白质，对于神经的生存、分化、轴突生长和维持各种功能至关重要。有的因子对神经轴突的生长有诱导作用，而有的则呈抑制作用。神经轴突的生长就是在多种因子的调节下向前延伸。我们的前期研究表明，外源性的神经营养——因子睫状神经营养因子(CNTF)，不但能促进轴突芽生、运动终板再生，而且对喉返神经有明显的减少错向再生的作用，从而对神经的再生起诱导作用。神经导管因其不需供体、可以防止周围疤痕组织长入、导向作用、可添加辅助因子等优势，而受广泛关注。因此，为了明确这两种营养因子的确切作用，我们借助可降解的PLGA/壳聚糖神经导管，进行了如下研究：
　　 一、在明确大鼠面神经及面神经核的解剖情况下，探讨并建立了有效的神经示踪方法，为后续研究奠定了基础。首先对大鼠的面神经进行全程解剖，结果表明：大鼠面神经各颅外分支均位于肌肉表面，350g左右大鼠的面神经主干自茎乳孔出颅，于腮腺后缘分出各主要分支，此段的主干长度为4.21±0.29mm，面神经主干的直径为0.73±0.07mm，这些数据为选择合适的神经导管和手术部位提供了依据。大鼠面神经核位于脑干中，于双耳间连线后约1.60±0.17mm始，向后延伸，纵径为1.65±0.05mm，横径为1.62±0.10mm。之后，应用三种示踪剂DiI、FG、TB标记面神经颊支进行标记，分析三种示踪剂的异同，发现三种示踪剂标记的神经数目上没有显著区别，P=0.761，但真蓝的运输速度要较另外两种要快，且其弥散情况稍重。此外，三种示踪剂的抗淬灭能力均较强，常温避光保存下三个月后仍可见明亮的荧光。在颊支上用DiI比较示踪剂使用的三种方法：肌肉注射法、神经断端涂抹法和神经揉搓半切注入法，结果表明，肌肉注射法与后两种方法差异显著，LSD法两两比较P值均为零，而后两种方法间无显著差异，P值为0.672。与标准方法、即神经断端涂抹法相比，神经揉搓法在保留部分神经功能、减少荧光染料使用及减轻荧光背景方面有明显的优势，在后续实验中可资推广。
　　 二、用含CNTF、GDNF营养因子的复合PLGA/壳聚糖可降解神经导管桥接成年SD大鼠面神经主干，术后第45天用DiI和TB分别标记术侧的面神经颧支和颊支，第52天处死大鼠，计算双标神经元及错位的神经元占所有再生的颧支和颊支再生神经元的比例，及大鼠术侧面神经最大诱发电位占健侧的比例，分析这两种神经营养因子对神经再生的诱导作用。结果表明，对照组错向再生细胞数占总再生细胞数的比例平均为17.98％，CNTF组为13.48％，GDNF组为14.24％，三组相比，CNTF组、GDNF组的错向率明显小于对照组，差异具有统计学意义(P均＜0.01)；而CNTF与GDNF组之间的差异无统计学意义(P＞0.05)。三组动物术侧面神经最大诱发电位占健侧百分率的平均值依次为36％、51.4％和57.5％，差异有统计学意义。
　　 综上所述，加入可降解神经生物导管内的神经营养因子CNTF和GDNF，可以降低大鼠面神经总干再生神经的错向率，从而发挥对神经再生的诱导生长作用，为临床的应用提供了实验上的依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分 大鼠面神经解剖及神经示踪模型的建立

实验一 大鼠面神经核、主干及各分支的解剖

一材料与方法

二 结果

三讨论

实验二 三种示踪剂示踪效率的比较

一 材料与方法

二 结果

三 讨论

实验三 用三种不同示踪方法标记大鼠面神经颊支运动神经元的比较

一 材料与方法

二 结果

三 讨论

参考文献

第二部分 带CNTF及GDNF的神经导管桥接大鼠面神经总干对神经的诱向再生作用

一 材料与方法

二 结果

三讨论

四 结论

参考文献

综述：可降解人工生物导管的发展与临床应用

一 简介

二神经导管

三小结

参考文献

学习期间发表论文及参加会议情况

致谢