急性坏死性胰腺炎大鼠肠梗阻机制及奥曲肽干预对肠道动力的影响

摘要

目的:急性胰腺炎是临床上严重威胁生命的常见疾病，其总死亡率是10-25％，重症胰腺炎死亡率接近30-40％。40-70％的急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis，ANP)的病人出现的继发性胰腺感染成为晚期死亡率的最重要的决定因素。现有很多研究证实了ANP急性期的胃肠动力改变，推测动力障碍与导致腹腔内器官感染的细菌的过度生长相关，参与了全身性炎症反应和难治的多器官功能衰竭的病理生理过程。然而导致ANP相关的肠梗阻的潜在机制目前并不明确，其发生原因可能包括调节动力的神经源性(肠神经)或肌源性(平滑肌，interstitial cells of Cajal，ICC)机制的损伤或改变。本课题旨在探究ANP病程中小肠动力的损害，及其相关肌源性(ICC)和神经源性机制及奥曲肽干预对肠道动力的影响及其相关机制。
　　 方法:采用雄性SD大鼠腹腔内注射30％L-鸟氨酸(3g/kg)的方法建立ANP模型，药物干预采用奥曲肽，每8h皮下注射。从功能学、形态学和分子生物学三方面，观察造模后24h、48h、72h小肠动力相关的ICC、平滑肌和肠神经的变化及给予奥曲肽干预对这些动力相关机制的影响。功能学分为在体小肠埋置电极记录其肌电活动的慢波和移行性肌电复合波(migrating myoelectric complexs，MMC)和离体器官浴槽灌流技术记录小肠的自发收缩情况和相关药理学实验。形态学包括观察胰腺病理、ICC和神经源性一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)、胆碱乙酰转移酶(cholineacetyltransferase， CHAT)、生长抑素(Somatostatin，SST)受体阳性神经的免疫荧光实验。分子生物学实验包括研究ICC、nNOS和CHAT的蛋白表达情况。
　　 结果:
　　 1.ANP大鼠在造模后24h、48h和72h三个时间点均出现急性坏死性胰腺炎的胰腺典型病理表现。
　　 2.急性坏死性胰腺炎大鼠造模后24h小肠推动率降低(P=0.002)；较造模前基础值相比，小肠肌电活动出现慢波主功率和主频率均降低(主频率：P=0.005；主功率：P=0.034)，快波的MMC周期延长(P=0.052)；小肠自发收缩的振幅较对照组降低(P=0.004)；药理学实验对ACh的反应较对照组减弱(P=0.05)，而对KCI的反应较对照组无显著变化(P=0.505)，对照组加入TTX后收缩张力减弱(P=0.045)而ANP组则未出现此变化(P=0.197)，对L-NNA的反应ANP组亦较对照组减弱(P=0.042)。免疫荧光观察发现ICC的两个亚型ICC-MY和ICC-DMP的荧光密度均较对照组减弱(ICC-MY，P=0.000；ICC-DMP，P=0.000)，PGP9.5标记的肠神经荧光密度较对照组减弱(P=0.001)，nNOS神经元数目也较对照组减少(P=0.000)。Western blot显示nNOS蛋白表达较对照组减弱(P=0.032)。
　　 3.造模后24h、48h和72h三个时间点观察到，ANP+生理盐水组慢波的主频率均较基础值显著降低(24h，P=0.046;48h，P=0.017；72h,P=0.004)；而ANP+奥曲肽组则在造模后三个时间点较基础值均无显著差别；而在同一时间点内，ANP48h和ANP72h，给予ANP+奥曲肽组主频率明显高于ANP+生理盐水组(48h，P=0.021；72h，P=0.081)。ANP+生理盐水组MMC周期在48h和72h时间点较基础值显著延长(48h，P=0.002；72h，P=0.006)，此变化趋势未发现于ANP+奥曲肽组；同慢波主频率变化类似，同一时间点内，ANP48h和ANP72h ANP+奥曲肽组MMC周期显著较ANP+生理盐水组缩短(48h，P=0.005；72h，P=0.004)。免疫荧光结果显示：ICC-DMP在48h和72h时间点，ANP+奥曲肽组较ANP+生理盐水组累计荧光密度显著增强(48h，P=0.028；72hP=0.01)。Western blot显示在72h时间点c-Kit的蛋白表达ANP+奥曲肽组显著高于ANP+生理盐水组(P=0.017)。
　　 4.小肠离体收缩振幅在ANP造模后24h和48h时间点，ANP+生理盐水组较对照组有显著减低(24h，P=0.004；48h，P=0.011)，而此变化趋势未发现于ANP+奥曲肽组；在对照组内和ANP24 h和48 h时间点内，各自小肠收缩振幅奥曲肽干预组均优于生理盐水干预组(对照组内，P=0.016；ANP24 h内，P=0.000；ANP48 h内，P=0.008)。药理学实验发现小肠收缩振幅对ACh的反应，在24h时间点，ANP+奥曲肽组显著大于ANP+生理盐水组(P=0.002)；对L-NNA的收缩反应，在24h时间点，ANP+奥曲肽组与ANP+生理盐水组有显著差异(P=0.053)。免疫荧光结果显示CHAT阳性神经元ANP+生理盐水组造模后三个时间点均较对照显著减少(24h，P=0.000；48h，P=0.000；72h，P=0.005)；而在24h和48h时间点内，ANP+奥曲肽组的CHAT阳性神经元数目高于无干预组(24h，P=0.034；48h，P=0.024)。与CHAT神经类似，nNOS阳性神经元在ANP+生理盐水组造模后三个时间点均较对照显著减少(24h，P=0.000;48h，P=0.000；72h，P=0.000)；而在24h和48h时间点内，ANP+奥曲肽组的nNOS阳性神经元数目高于ANP+生理盐水组(24h，P=0.003；48h，P=0.046)。Western blot在ANP24h时间点奥曲肽干预组较生理盐水干预组CHAT神经的蛋白表达增高(P=0.057)。而nNOS神经的蛋白表达则在48h时间点奥曲肽干预组显著高于生理盐水组(P=0.032)。
　　 结论:ANP病程中出现小肠动力功能紊乱，其潜在机制涉及调节动力的神经源性(肠神经：nNOS、CHAT神经元)或肌源性(平滑肌、ICC)机制的改变。奥曲肽的干预，一定程度上保护了ICC和nNOS、CHAT神经，部分逆转了其相关动力障碍，是ANP病程中肠道动力的潜在保护因素。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

第一部分 急性坏死性胰腺炎大鼠模型的建立及肠道动力检测方法

一、材料

二、方法

三、课题设计

四、讨论

第二部分 急性坏死性胰腺炎大鼠小肠动力障碍的机制

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第三部分 奥曲肽干预对急性坏死性胰腺炎大鼠小肠Cajal间质细胞的影响

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第四部分 奥曲肽干预对急性坏死性胰腺炎大鼠小肠肠神经的影响

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

全文总结

综述 肠道炎症和恢复期Cajal间质细胞变化的相关机制

全文参考文献

在读期间发表文章和科研工作

致谢