肌内神经血管同时显示方法的研究及其在临床常用肌肉上的应用

摘要

一、研究目的
　　 随着临床外科学尤其是显微外科的发展，吻合血管和神经的游离组织移植手术越来越广泛，为了达到重建受区功能和避免供区功能障碍的目的，肌肉的部分移植也变得越来越重要，这就需要我们尽可能详细地了解肌内神经和血管在肌肉内的分布、走行，以及它们之间的相互关系。研究肌内神经分布的方法有解剖、计算机重建和Sihler's肌内神经染色法。前两种方法存在着许多不足之处，但Sihler's染色技术能在保持肌肉大体形态的情况下使整个标本变得透明或者半透明，将神经主干及其分支染成蓝紫色，神经在肌肉内的分布及走行清晰可见，被认为是研究肌内神经的理想方法。研究肌内血管分布的方法主要是血管灌注造影剂，在X线下拍片显示。造影剂有很多，应用较多的是硫酸钡和氧化铅，但由于氧化铅的毒性，使得硫酸钡成为主要造影剂，配合钼靶拍照，使得结果清晰明了。以前学者研究肌内神经和血管时都是分开进行的，也就是在一块肌肉上研究肌内神经，而在另外一块肌肉上研究肌内血管，这样就不能准确地反映两者之间的关系。也有学者报道了在同一块肌肉上研究肌内神经和血管的方法，但是没有达到理想的效果。本研究旨在探讨在同一块肌肉上研究肌内神经和血管分布的方法，并在临床常用肌瓣上进行应用。
　　 二、研究方法
　　 方法一：家兔5只过量麻醉处死后，经腹主动脉向远侧灌注硫酸钡乳胶。乳胶凝固后分离出股薄肌、股二头肌和腓肠肌，继续进行Sihler's肌内神经染色。具体步骤如下：(1)固定(Fixation)：10％的甲醛溶液固定标本3周，液体变混浊时更换液体；(2)浸软和除色素(Maceration and Depigmentation)：固定后的组织在流水下冲洗半小时，置入3％氢氧化钾(每100毫升加入3％双氧水0.2毫升)，2～3天换液体一次直至肌肉淡黄色褪尽，肌肉发白呈半透明，此过程一般需要2～3周；(3)脱钙(Decalcification)：肌肉流水下冲洗半小时入溶液，每5天换液一次，脱钙后的肌肉会丧失透明度或皱缩，此过程需要2～3周；(4)染色(Staining)：脱钙后的肌肉蒸馏水浸泡1小时，中间更换蒸馏水2次，浸入Sihler'sⅡ溶液，此过程约需2～3周；(5)脱色(Destaining)：染色后，肌肉重新入Sihler'sⅠ溶液中(液体变成黄褐色时及时更换新的Sihler'sⅠ溶液)，当肌肉纤维脱色，神经主干及肌肉内分支变成蓝紫色时停止，此过程约需20小时；(6)中和(Neutralization)：脱色后的肌肉蒸馏水浸泡1小时，入0.05％碳酸锂溶液(需要加热才能溶解)中浸泡2小时，中间轻轻搅动数次；(7)透明(Clearing)：中和后的肌肉逐渐入40％，60％，80％，100％甘油中，每一个浓度浸泡3-4天；(8)保存：最后标本避光保存于100％甘油中(加入少量的麝香草酚)。染色结束后，将标本放置于有机玻璃托盘，标本边缘空白处放置两枚金属标记物，在保持肌肉形态不变的情况下分别进行肌内神经光学背光拍照和钼靶拍照，得到图片A和B，最后在计算机上根据金属标志物将两幅图片完全重叠，画出肌内血管和神经的走行分布模式图，达到在同一块肌肉上同时显示肌内神经和血管的目的。
　　 方法二：1、家兔5只过量麻醉处死后，经腹主动脉向远侧灌注半透明红色乳胶。乳胶凝固后分离出股薄肌、股二头肌和腓肠肌。2、新鲜童尸3具，经腹主动脉分别向近侧和远侧灌注半透明红色乳胶。乳胶凝固后分离出背阔肌和股薄肌。将以上分离出的肌肉标本继续进行Sihler's肌内神经染色。染色步骤同上。染色结束后，在X线观片灯上可以清楚地看到肌内神经和血管，神经显示为蓝紫色，血管显示为红色。这样就能直观地显示神经和血管的准确信息以及它们之间的相互关系，达到了在同一块肌肉的同一张照片上同时显示肌内神经和肌内血管的目的。
　　 三、结果
　　 方法一中所得到的肌肉标本的图片A和图片B清晰明了，从图片A中能看到肌内神经和肌内血管的信息，图片B中的线条信息全部是肌内血管的分支信息，通过图片重叠，可以将图片A中有关血管的信息辨别出来，剩余的线条信息就是肌内神经的信息。方法二所得到的图片中肌内神经呈现蓝紫色，而肌内血管呈现红色，两者对比明显，使得结果更加准确直观。可以看出研究中的两种方法均能够在同一块肌肉上同时显示肌内神经和肌内血管的信息，清晰直观地显示神经和血管在肌肉内的走行以及两者之间的关系，而且通过这两种方法所得到的结果是一致的。它不仅适用于动物实验，在新鲜尸体上同样具有良好的结果：1、股深动脉分支与闭孔神经前支在进入股薄肌之前有一段相同的走行，两者共同组成血管神经蒂进入肌肉，在肌肉内的走行有明显的伴行关系，据此可以将股薄肌分成数个肌亚部。而股动脉分支则单独走行，与神经分支没有明显的伴行关系。2、胸背动脉和神经在背阔肌外即组成血管神经蒂，入肌点相同，入肌后各自的分支也相互伴行。据此我们可以将背阔肌分成3～4个肌肉亚部，每个肌肉亚部都有相对稳定的血管神经支配。
　　 四、结论
　　 1、本研究中所发现的两种方法均能达到了预期的目的。1、方法一中通过图片重叠，可以将肌内神经和肌内血管进行区别，绘制出肌内神经和血管的模式图。2、方法二中所得到的图片中，肌内神经呈现蓝紫色，而肌内血管呈现红色，两者颜色差别明显，使得结果更加准确直观。这两种方法均首次清晰直观地显示了同一块肌肉的肌内神经和血管的分布、走行以及两者之间的关系，相比以前的研究方式来说是一个重大创新，对于解剖学和临床医学具有重大而深远的意义。
　　 2、这两种方法各有优势。当研究的肌肉比较小，或者肌肉比较扁阔时，建议用比较简单快捷的第二种方法；当研究的肌肉的体积比较大时，建议用第一种方法，以便能更好地区分肌内的神经和血管，使研究结果更加准确。
　　 3、通过本研究中的方法对肌肉标本进行研究，具有重要的意义：
　　 (1)是对解剖学的重要补充，完善解剖学的内容；
　　 (2)指导临床选择理想的手术入路，避免不必要的神经血管损伤；
　　 (3)对常用肌肉进行肌亚部划分，指导临床进行部分肌肉移植，既重建受区功能，又避免供区功能障碍；
　　 (4)指导临床用同一块肌肉重建几个部位的功能，节约供区资源。
　　 4、发现了一些肌内神经血管分布的规律：
　　 (1)一块肌腹通常由一条神经主干支配，而血液供应通常有两条以上；
　　 (2)当供应肌肉的血管有两条以上时，神经一般伴随肌肉的主要供应血管入肌；
　　 (3)当神经血管共同组成神经血管蒂一起入肌时，它们进入肌肉后的分支，分布是紧密伴行的。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英对照

声明

前言

方法一 Sihler's染色法与钼靶拍照相结合

一、材料和方法

二、实验结果

三、讨论

方法二 Sihler's染色法与彩色血管灌注相结合

一、材料和方法

二、实验结果

三、讨论

分析与讨论

一、研究背景和意义

二、研究方法的改进和比较

三、所研究肌肉的临床应用

四、肌内神经血管分布规律

结论及意义

参考文献

发表文章

发表论文一

发表论文二

发表论文三

发表论文四

致谢