树突状细胞在硼替佐米对急性移植物抗宿主病的不同效应中起重要作用

摘要

异基因造血干细胞移植是治愈血液系统恶性疾病的根本治愈方法。但是，其严重并发症移植物抗宿主病(GVHD)限制了造血干细胞移植的广泛应用。众所周知，急性GVHD(aGVHD)是一炎性反应过程，主要由供体T淋巴细胞攻击受体组织造成。抗原递呈细胞，尤其是宿主树突状细胞(DC)在aGVHD的启动中发挥重要作用。异源性供体T淋巴细胞的活化在很大程度上取决于预处理时或预处理后受体体内DC的活化状态。未成熟DC(imDCs)主要功能是抗原摄取，但是抗原递呈能力比较弱，因此活化T淋巴细胞能力比较弱。而在病原体来源的细菌脂多糖(LPS)或内源性炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激下，imDCs分化为成熟DC(mDCs)，迁移到淋巴组织中发挥效应。mDCs具有较强的抗原递呈能力和活化T淋巴细胞功能。NF-κB是广泛分布在几乎所有细胞中的转录因子，它能控制与免疫及炎症反应相关的基因表达，而这些基因与aGVHD病理过程密切相关。值得注意的是，刺激DC成熟的信号也能活化NF-κB，提示我们NF-κB信号通路可能参与DC成熟过程。
　　 硼替佐米(PS-341；Velcade)是一个可逆性蛋白酶体抑制剂，它有很多生物学功能，其中包括阻断NF-κB活化。硼替佐米阻断NF-κB的能力，使其在aGVHD防治中具有潜在价值。动物模型和部分临床资料的结果显示，硼替佐米能减轻aGVHD。但是，在动物模型中发现，骨髓移植后如果延迟给予硼替佐米反而加重aGVHD。
　　 因此，为明确究竟在什么条件下，硼替佐米能改善aGVHD从而扩大其临床应用价值，我们通过建立了一系列不同严重程度的小鼠aGVHD模型的方法，并选择移植后不同时间给予硼替佐米，观察硼替佐米对aGVHD的影响及涉及机制。以下是主要研究方法和结果：
　　 一.早期硼替佐米干预能缓解轻微aGVHD模型中小鼠aGVHD表现
　　 方法：通过给致死性照射后的BALB/c小鼠输注递减剂量的供体C57BL/6小鼠脾脏细胞(SC)2×107、1×107、5×106，分别建立严重、中等严重和轻微程度小鼠aGVHD模型。在不同模型中，硼替佐米选择在移植后d0-2或d6-8腹腔注射，通过观察移植后小鼠生存时间、体重变化、靶器官病理损害、供体T淋巴细胞增殖、血清炎性因子表达等，分析硼替佐米对小鼠aGVHD影响。
　　 二.硼替佐米依赖的aGVHD改善与干预前低水平的TNF-α、LPS以及相对不成熟的宿主DC状态有关
　　 方法：在中等严重或轻微程度小鼠aGVHD模型中(SC1×107，5×106)，通过酶联免疫法检测(ELISA)硼替佐米干预前血清和组织中TNF-α水平，及鲎试剂法检测血清中LPS水平，流式细胞术检测脾脏中表达TNF-α的供体T淋巴细胞数目和宿主树突状细胞(DC)表面MHCⅡ类分子表达。
　　
　　 三.硼替佐米体外能抑制未成熟DC(imDCs)表型和功能成熟，但是对已成熟DC(mDCs)无明显作用
　　 方法：骨髓前体细胞在mGM-CSF和mIL-4条件下分化成imDCs，TNF-α或LPS将imDCs诱导成mDCs。通过流式细胞术，观察硼替佐米对不同成熟状态DC成熟表型的影响；通过Annexin V-FITC和PI双标记，观察硼替佐米对不同成熟状态DC凋亡的影响；通过混合淋巴细胞反应(MLR)，观察硼替佐米对不同成熟状态DC刺激异基因T淋巴细胞能力及调节性T细胞(Tregs)的影响；通过Western-blot，观察硼替佐米对不同成熟状态DC中IκBα表达水平的影响。
　　 结论：蛋白酶体抑制剂硼替佐米在aGVHD防治中是一把双刃剑。早期硼替佐米干预能改善轻微aGVHD，可能是通过干预受体小鼠体内的imDC，而非已经成熟的mDC。本研究对硼替佐米干预的免疫学和药理学有了崭新认识，同时也提示在实验和临床应用方面，imDC可作为硼替佐米调控的靶细胞。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分硼替佐米对小鼠急性GVHD的干预有不同的调节作用

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

第二部分硼替佐米体外对不同成熟状态树突状细胞的影响

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

全文小结

参考文献

综述 移植物抗宿主病研究进展

在读期间发表论文及申请基金

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