左卡尼汀对波动性高糖处理的大鼠心肌细胞脂联素受体表达影响的实验研究

摘要

研究主要目的:本课题意研究波动性高糖对大鼠心肌细胞脂联素受体(AdipoR)表达的影响，并探讨在补充了L-CN后心肌细胞AdipoR的表达变化情况。从而明确L-CN在其中的作用。如果实验结果像预期所想，那么我们可以推想左旋卡尼汀在改善糖尿病心肌能量代谢的同时，可通过增加脂联素受体的表达水平达到降低胰岛素抵抗及糖尿病相关性肥胖的作用。并可通过后续动物实验、临床观察验证此设想。从而左旋卡尼汀可为同时患有缺血性心脏疾病，糖尿病的患者带来福音。
　　 研究方法:一、大鼠心肌细胞（RMCs）的培养与鉴定SD大鼠心肌细胞株(购自上海中科院)，细胞复苏，DMEM培养基（6.1mmol/L）常规培养，观察细胞形态，台盼蓝染色计数并鉴定细胞存活率。二、波动性高糖处理大鼠心肌细胞实验用细胞先经过无血清DMEM（6.1mmol/L）培养基预处理12h，使其处于同步化状态。实验分组：普通培养基组、高糖培养基组、波动性高糖培养基组、L-CN 处理各组。波动性高浓度葡萄糖(即每8h轮换加入5.5mmol/L或20mmol/L葡萄糖溶液)常规培养5d。后用CCK8 法检测RMCs的增殖活化情况。三、L-CN刺激波动性高糖处理的大鼠心肌细胞（一）不同浓度L-CN刺激24h。L-CN 处理组（工作浓度分别为102μμ,2.5×102μμ,5×102μμ，103μμ，104μΜ）。（二）一定浓度L-CN 刺激不同时间L-CN工作浓度5×102μμ，L-CN处理组(5×102μμ刺激0h、4h、8h、12h、24h、36h、48h)，四、检测CCK8 法检测RMCs增殖活化情况。ReAltime PCR 检测AdipoR mRNA表达的改变。五、统计学分析数据用x±s表示，所有统计学数据均用SPSS l8.0软件处理：组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t 检验，方差齐性用LSD方法比较；方差不齐用Dunnett’s方法比较。P<0.05认为有统计学差异。
　　 结果:（一）细胞计数及存活率鉴定台盼蓝染色RMCs存活率在90％以上，能满足实验需要。（二）CCK8 法检测RMCs的增殖活化情况1、CCK8 法检测RMCs在不同浓度L-CN 刺激24h后的增殖活化情况。与普通培养基组相比，高糖组心肌细胞OD值降低不明显；波动性高糖组心肌细胞OD值减小，与普通培养基组比较具有显著性差异(P<0.05)；L-CN（5×102μΜ）处理组较波动性高糖组OD值增加，有统计学意义(P<0.05)；L-CN（2.5×102、103、104μΜ）处理组较波动性高糖组OD值增加,无统计学意义(P>0.05)；L-CN（105、106μΜ）处理组较波动性高糖组OD值下降。2、CCK8 法检测RMCs在一定浓度L-CN刺激不同时间后的增殖活化情况。与普通培养基组相比，高糖组心肌细胞OD值降低不明显；波动性高糖组心肌细胞的OD值减小具有显著性差异(P<0.05)；L-CN（5×102μμ刺激4h、8h、12h）较波动性高糖组OD值增加，但无统计学意义；L-CN（5×102μμ刺激24h、36h、48h）较波动性高糖组OD值增加(P<0.05)。3、不同浓度L-CN 刺激24h后AdipoR mRNA表达情况与普通培养基组比较，波动性高糖处理组AdipoR mRNA的表达显著性下降（P<0.01）；与波动性高糖处理组比较在加入L-CN处理的各组心肌细胞中，AdipoR1、AdipoR2mRNA的表达均显著性升高(P<0.01)；且L-CN的工作浓度在5×102μμ时AdipoR mRNA升高最明显(P<0.01)。4、一定浓度L-CN 刺激不同时间后AdipoR mRNA表达情况与波动性高糖组比较，在加入L-CN（5×102μΜ）处理的各时相心肌细胞中，AdipoR1mRNA的表达均有升高，且在药物作用24h时升高最明显(P<0.05)。与AdipoR1相比AdipoR2 mRNA的表达表现出不稳定的特点。与波动性高糖组比较，在加入L-CN（5×102μΜ）处理4h时AdipoR2 mRNA的表达不升反而下降；12h时与波动性高糖组比较升高但无统计学意（P>0.05）；作用在24h、36h、48h时AdipoR2 mRNA的升高与作用时间成正相关(P<0.01)。
　　 结论:波动性高糖与单纯高糖相比对细胞的损害作用更强，左卡可在一定程度上降低波动性高糖引起的细胞损害作用，药物有效浓度在102-104μμ之间，且左卡对波动性高糖处理的大鼠心肌细胞的这种促增值作用表现出时间依赖性的特点。L-CN处理后RMCs AdipoR1mRNA、AdipoR2 mRNA均明显增高（P<0.01），当L-CN工作浓度在5×102μμ时，AdipoRmRNA表达增加更明显，且RMCs AdipoR1mRNA、AdipoR2 mRNA的增高表现出明显的时间依赖性，L-CN（5×102μΜ）处理24小时后AdipoR mRNA (尤其AdipoR1mRNA)增加最明显(P<0.05)。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分用波动性高糖处理大鼠心肌细胞（RMCs）及鉴定细胞

第二部分不同浓度左卡尼汀对波动性高糖处理RMCs脂联素受体表达的影响

第三部分左卡尼汀（L-CN）对波动性高糖处理的RMCs作用不同时间后脂联素受体表达的变化

全文总结

综述

在读期间发表文章

致谢