硫化氢对大鼠肠缺血再灌注后回肠收缩活性和肠神经的保护作用

摘要

研究目的：肠缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）损伤可在出血性休克、小肠移植、机械性梗阻和严重外伤等过程中发生，可引起小肠收缩活力降低、微血管通透性升高和肠黏膜屏障功能下降，并可引起肠道细菌移位进而导致多脏器功能衰竭综合征。肠缺血再灌注可通过引起肠神经元、平滑肌细胞、CajAl间质细胞（interstitiAlcells of Cajal,ICC）的凋亡而引起小肠运动功能障碍，尤其是肠神经系统（enteric nervous system，ENS）中胆碱能肠神经受损从而引起兴奋性神经递质乙酰胆碱（acetylcholine，Ach）减少是最重要的原因之一。尽管肠缺血再灌注在临床中较为常见且可引起严重的并发症和死亡率，但是仍缺乏有效的治疗药物。硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）是一种内源性气体信号分子，在哺乳动物体内发挥着许多重要的生理功能。近来，许多学者证实其可在多种脏器如心、肺、肝、肾、肠缺血再灌注模型中起到保护作用。但这些实验多数都是在缺血前预防性的给予硫化氢，尚未有实验证实硫化氢能否在缺血之后起到保护肠神经及肠运动功能的作用。本课题旨在研究在缺血之后再灌注之前给予硫化氢是否有保护肠收缩活性和肠神经元的作用及相关机制。
　　 研究方法：24只雄性SD大鼠随机分为4组（每组6只）：正常组（A），假手术组（B），肠缺血再灌注组（C），肠缺血再灌注加硫化氢干预组（D）。C组和D组大鼠通过夹闭肠系膜上动脉1h后松开血管夹再灌注4h 来建立肠缺血再灌注模型；硫化氢的供体NaHS （10μmol/kg）于再灌注前20min 腹腔内注射；B组大鼠仅行开腹后翻动肠道而未夹闭动脉。功能学实验通过离体器官恒温浴慒灌流技术记录离体回肠肌条自发收缩和对氯化钾（KCl；30mmol/L）、乙酰胆碱（Ach；10-5mol/L）、电场刺激（electricAlfieldstimulation，EFS；30V，10Hz，1.00ms，10s）的反应。形态学实验通过免疫荧光检测肠肌间神经丛（myenteric plexus，MP）中Hu蛋白、胆碱乙酰转移酶（cholineacetyltransferase，ChAT）受体阳性神经元表达的变化。
　　 结果：1、与正常组相比，假手术组离体肌条自发收缩频率、曲线下面积、对KCl、Ach和 EFS的反应、Hu蛋白和ChAT 受体阳性神经元表达均无明显改变。2、与假手术组相比，缺血再灌注组大鼠离体肌条自发收缩频率、对KCl和Ach的反应无明显改变；离体肌条自发收缩曲线下面积降低（p<0.05），对EFS的反应明显下降（p<0.05）；在免疫荧光中，Hu蛋白、ChAT 受体阳性神经元表达均明显降低（p<0.05）。3、与缺血再灌注组相比，硫化氢干预组大鼠离体肌条自发收缩频率、对KCl和Ach的反应无明显改变；离体肌条自发收缩曲线下面积升高（p<0.05），对EFS的反应升高（p<0.05）；在免疫荧光中，Hu蛋白、ChAT 受体阳性神经元表达均明显升高（p<0.05）。
　　 结论：1、肠缺血再灌注（I1h/R4h）未对ICC和平滑肌细胞造成明显损伤，主要通过引起含兴奋性神经递质Ach的胆碱能肠神经的损伤导致离体肌条自发收缩活力的下降。2、硫化氢主要通过保护肠神经元尤其是兴奋性神经元而部分的保护了离体肌条的收缩功能。

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文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

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前 言

第一部分 硫化氢对大鼠肠缺血再灌注后回肠收缩活性的保护作用

第二部分 硫化氢对大鼠肠缺血再灌注后肠肌间神经丛的保护作用

全 文 总 结

参考文献

综 述 硫化氢对消化系统的调节作用

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致 谢