腰椎手术失败综合征的临床研究及预防硬膜外瘢痕粘连的实验研究

摘要

研究目的
　　 1、通过收集腰椎手术失败综合征的病例，分析目前发生FBSS的原因并评估相应的预防及处理措施；
　　 2、制备出羟基喜树碱脂质体，并考察其稳定性、生物相容性等基本性质；
　　 3、通过实验验证羟基喜树碱脂质体在新西兰兔椎板切除术后模型中有效预防硬膜与围组织粘连，且无明显毒副作用。
　　 研究方法
　　 1、收集自2005年至2011年本治疗组收治的腰椎手术失败综合征患者的病例资料，分析其原因并评估处理措施。
　　 2、采用薄膜-超声分散法制备羟基喜树碱脂质体，10-羟基喜树碱、磷脂、胆固醇溶于氯仿-甲醛(1:1混合)中。此混合液在全旋转蒸发仪内40℃下减压除去溶媒，加入一定比例的甘露醇或者葡萄糖作为冻干保护剂，形成薄膜。加入双蒸水使磷脂的浓度为80mM，洗膜得脂质体混悬液。羟基喜树碱脂质体混悬液经超声波、分装、冷冻、干燥制成羟基喜树碱脂质体冻干粉针备用。
　　 3、在4℃、25℃、40℃等不同温度下考察冻干羟基喜树碱脂质体稳定性，包括外观、粒径及包封率，并评估其生物相容性。
　　 4、制备新西兰兔L5椎板切除术模型并分组，第一组新西兰兔硬膜囊以脑棉浸泡羟基喜树碱溶液湿敷5分钟后，以生理盐水冲洗三次，逐层缝合骶棘肌、腰背筋膜及皮肤。第二组新西兰兔硬膜囊后方放置羟基喜树碱脂质体，逐层缝合骶棘肌、腰背筋膜及皮肤。第三组新西兰兔硬膜后方以生理盐水冲洗，逐层缝合骶棘肌、腰背筋膜及皮肤，作为对照组。
　　 5、术后4周处死实验动物，取出硬膜外瘢痕组织。Masson染色切片(放大率x400)观察硬膜外瘢痕中胶原的排列、走向和密度，HE染色切片(放大率x400)观察硬膜外瘢痕分布，成纤维细胞、炎症细胞分布情况以及粘连程度。利用LeicaQwinPlus计算机图像分析系统测定硬膜外瘢痕面积及成纤维细胞数量；利用流式细胞仪检测瘢痕组织中成纤维细胞凋亡率。
　　 结果
　　 1、初次手术方式为单纯髓核摘除者，复发的原因多为原手术间隙髓核组织再次突出，本组残遗髓核复发突出者21例，占32.8％；初次手术方案为髓核摘除+植骨椎弓根螺钉内固定，复发原因大多为相邻节段退变，椎间盘突出，本组临近节段退变突出者19例，占29.7％。FBSS的原因并非单一因素，复发突出21/64，占32.8％；临近节段退变突出19/64，占29.7％；内固定失败6/64，占9.3％；椎间隙感染11/64，占17.2％；硬膜外瘢痕粘连7/64，占10.9％。
　　 2、制备的羟基喜树碱脂质体性质稳定、生物相容性好，符合实验要求。
　　 3、在应用羟基喜树碱脂质体处理动物模型中，瘢痕组织与硬膜外存在疏松瘢痕组织，与硬膜无明显粘连，有少量成纤维细胞与纤维细胞，未见明显炎性细胞；计算机分析硬膜外瘢痕面积与成纤维细胞计数也较对照组减少；流式细胞仪检测的成纤维细胞凋亡率明显增高。
　　 结论
　　 硬膜外瘢痕粘连是腰椎手术综合征的一个重要原因，而且处理困难，预后不佳；制备所得的羟基喜树碱脂质体性质稳定，生物相容性好，在新西兰兔L5椎板切除术后抑制了硬膜外瘢痕的形成，有较好的防粘连效果。