声明
摘要
缩略词表
前言
第一部分 大鼠原代肝星状细胞激活过程中Sulf-1基因表达的变化
(一)实验材料
1.实验动物
2.主要的实验器材
3.主要的实验试剂
4.主要试剂的配制方法
5.主要实验仪器
(二)实验方法
1、原代肝星状细胞的分离
2、细胞培养方法
3、Western Blot检测原代肝星状细胞激活过程中α-SMA、GFAP、Desmin、F4/80的表达
4、检测原代肝星状细胞激活过程中Sulf-1基因表达水平的变化
(三)实验结果
(四)实验讨论
1.原代肝星状细胞的分离方法
2.原代肝星状细胞的鉴定
3.大鼠原代肝星状细胞激活过程中Sulf-1基因的表达水平下降
第二部分 重组TGF-β1因子对肝星状细胞系LX-2和HSC-T6增殖能力的影响
第三部分 肝星状细胞系中的hSulf-1基因表达的干预
(一)实验材料
1、病毒载体和质粒载体
2、所需主要试剂
3、主要实验仪器
4、主要溶剂的配制
(二)实验方法
1、hSulf-1基因及其N端活性片段腺病毒载体的构建
2、Ad5-hSulf1、hSulf1-shRNA分别干预肝星状细胞系LX-2,摸索最佳感染条件和转染条件
(三)实验结果
1、hSulf-1基因腺病毒载体及其N端活性片段质粒载体的构建
2、Ad5-hSulf1、hSulf1-shRNA干预肝星状细胞系LX-2
(四)实验讨论
第四部分 腺病毒介导的hSulf-1基因高表达对肝星状细胞系LX-2和HSC-T6激活的抑制作用
(一)主要实验材料
(二)实验方法
1、肝星状细胞系LX-2和HSC-T6按每孔约5×105的密度在6孔板中铺板
2、24h后,干预细胞
3、24h后,收集细胞
(三)实验结果与实验讨论
1、hSulf-1基因能抑制重组TGF-β1因子诱导下肝星状细胞的激活,减少α-SMA的表达
2、hSulf-1基因能减少TGF-β1因子诱导下肝星状细胞对TGF-β1因子的自分泌
3、hSulf-1基因能减少TGF-β1因子诱导下肝星状细胞中胶原蛋白CollagenⅠ和CollagenⅢ的产生
4、hSulf-1基因能减少TGF-β1因子诱导下肝星状细胞中TIMP-1的产生
5、hSulf-1基因能减弱TGF-β1因子诱导下Erk通路的激活
6、hSulf-1基因能减弱TGF-β1因子诱导下Akt通路的激活
7、hSulf-1基因能减弱TGF-β1因子诱导下Smad通路的激活
8、NSulf-1活性片段具有和hSulf-1基因类似的作用
全文小结
参考文献
综述 肝纤维化进程中肌成纤维细胞的多种来源
硕士期间发表的论文
致谢