粉刺锦鸡儿抗类风湿性关节炎活性及化学成分研究

摘要

类风湿性关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎及浆膜、眼、皮肤、心肺、血管等结缔组织广泛性炎症为主要表现的慢性全身性免疫疾病。其发病机理尚不明确，主要特征是软骨和骨组织的破坏，极易致残，严重影响患者的生活质量。RA治疗周期较长且费用较高，因此RA患者在忍受身心痛苦的同时也背负着了沉重的经济负担。目前RA尚无特效疗法，现行的治疗方法包括手术治疗、化学药物治疗和生物制剂治疗。手术治疗对机体的损伤较大，而且费用昂贵;化药治疗极易产生不良反应，且毒副作用严重;生物制剂在杀死病变细胞的同时对正常细胞也有干扰。因此，寻找高效低毒的抗RA药物仍是医学界面临艰巨任务。
　　中药来源的抗RA药物在化学结构方面具有多样性，同时在作用机制方面也具有多样性。少数民族传统医药是中药的重要组成部分，有丰富的实践经验和独特的理论基础。维药是我国四大少数民族药（藏、蒙、维、傣）之一，它主张内病外治，外病内治，内外相合，沿用至今，在防治慢性病方面有很好的疗效。新疆属于干旱半干旱的地区，昼夜温差大，这种气候极易导致关节风湿疾病的发生，但是新疆地区风湿、类风湿的患病率并不高，原因就在于维药形成防治风湿、类风湿的体系。
　　鉴于此，通过文献查考和资源调查，选取40多种具有祛风除湿的新疆药用植物进行抗RA活性筛选，筛选到豆科(Leguminosae)锦鸡儿属(Caragana Fabr.)粉刺锦鸡儿（Caragana pruinosa Kom.）具有良好的抗RA活性。鉴于粉刺锦鸡儿在民间广泛用于治疗RA，但其化学成分及药理作用未见报道。因此，本课题对粉刺锦鸡儿的抗RA药理活性及化学成分进行系统研究，为该药用植物资源进一步开发利用奠定基础。本课题的主要研究内容如下:
　　一、粉刺锦鸡儿体内抗类风湿性关节炎活性研究
　　采用Ⅱ型胶原蛋白诱导的类风湿性关节炎大鼠模型，考察粉刺锦鸡儿根80％乙醇提取物的体内抗类风湿性关节炎活性。结果显示:锦鸡儿提取物可显著降低RA大鼠关节炎指数，抑制踝关节肿胀程度;下调大鼠血清中炎性细胞因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和C反应蛋白水平，上调白介素10(IL-10)水平;病理切片显示，粉刺锦鸡儿可显著减少滑膜增生及炎性细胞浸润。上述研究表明，粉刺锦鸡儿具有良好的抗RA活性。
　　二、粉刺锦鸡儿化学成分研究
　　采用现代色谱和光谱技术（核磁、质谱、红外等），对粉刺锦鸡儿根进行系统的化学成分分离与鉴定，共分离鉴定化合物14个，均为黄酮类化合物。其中包括6个新化合物（含1个具有螺杂环结构的新颖异黄酮）和2个新天然产物，其他均为从锦鸡儿属植物中首次分离得到。药理活性研究表明，粉刺锦鸡儿具有异丙烯基苯并呋喃结构片段的黄酮类成分具有良好的抗炎活性，可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中的NO生成，提示此类成分是粉刺锦鸡儿抗RA的主要活性物质基础。
　　三、粉刺锦鸡儿不同药用部位总黄酮含量测定及化学成分比较分析
　　鉴于化学成分研究中分离得到的均为黄酮类化合物，推测粉刺锦鸡儿中富含此类成分。因此，采用紫外分光光度法对粉刺锦鸡儿不同药用部位（根、茎和种子）的总黄酮含量进行测定，结果表明粉刺锦鸡儿根部位的总黄酮含量为0.90 mg/g生药量，高于茎（0.24mg/g生药量）和种子（0.87mg/g生药量），进一步研究发现根的黄酮类成分主要富集在乙酸乙酯部位，含量为2.53 mg/g生药量。
　　采用高效液相色谱(HPLC)对粉刺锦鸡儿不同药用部位（根、茎和种子）的整体化学轮廓进行比较分析，结果表明，根和种子化学成分相似度较高;进一步采用液质联用(LC/MS)技术，结合锦鸡儿属已知化学成分数据库进行匹配，对粉刺锦鸡儿的化学成分进行比较分析，从根中匹配已知化合物81个，茎叶76个，种子70个，多数为黄酮类成分。其中，根与茎叶相同化合物47个，根与种子相同化合物45个，显示3个药用部位化学成分存在一定的相似性。粉刺锦鸡儿传统药用部位为根，过度开发利用势必造成环境和资源的双重破坏，以上研究结果提示，茎和种子具有替代根入药的潜在应用价值。
　　综上研究，本课题明确了粉刺锦鸡儿具有良好的抗RA活性，黄酮类成分为其主要活性物质基础，总黄酮含量测定及化学成分比较分析表明茎和种子具有替代根入药的潜在应用价值，为粉刺锦鸡儿药用资源的进一步开发利用奠定了坚实基础。

目录

声明

摘要

缩略说明

前言

第一章 粉刺锦鸡儿抗类风湿性关节炎活性研究

第一节 粉刺锦鸡儿体内抗类风湿性关节炎活性研究

第二节 本章小结

第二章 粉刺锦鸡儿化学成分研究

第一节 粉刺锦鸡儿化学成分系统分离与鉴定

一 化学成分分离

二 化合物结构鉴定

第二节 单体化合物体外抗炎活性研究

第三节 本章小结

第三章 粉刺锦鸡儿不同药用部位总黄酮含量测定及化学成分比较分析

第一节 粉刺锦鸡儿不同药用部位总黄酮含量测定

第二节 粉刺锦鸡儿不同药用部位化学成分HPLC分析

第三节 粉刺锦鸡儿不同药用部位UHPLC-Q-TOF-MS分析

第四节 本章小结

第四章 研究总结

参考文献

综述

在读期间科研及发表文章情况

致谢

附录