RNA解螺旋酶DDX5的表达与调控对肝内胆管癌生物学特性的影响及其临床病理学意义的研究

摘要

第一章 DDX5的表达调控对ICC生物学特性的影响及其可能机制
　　目的:
　　探讨下调DDX5对肝内胆管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）RBE细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其细胞周期的影响及其可能的分子机制。
　　方法:
　　DDX5-hRNA慢病毒转染ICC细胞株RBE，利用Western Blot实验检测慢病毒转染后RBE细胞中DDX5蛋白表达水平的变化，通过流式细胞仪和Alamar Blue法检测DDX5表达下调后对RBE细胞周期及增殖的影响。此外，采用划痕实验及Transwell侵袭实验检测DDX5对RBE细胞迁移和侵袭能力的影响，采用Western Blot实验检测DDX5表达下调后EMT相关分子的表达变化。
　　结果:
　　Western Blot法检测结果显示，DDX5-shRNA组中RBE细胞中DDX5蛋白的表达水平较空白对照组及阴性对照组显著降低，提示DDX5-shRNA转染能有效抑制RBE细胞中DDX5蛋白的表达。Alamar Blue实验检测结果显示，DDX5-shRNA组在48小时所检测得到的细胞增值率均明显低于空白对照组及阴性对照组(P值均＜0.05);划痕愈合实验显示，24小时后，DDX5-shRNA组RBE细胞的迁移率明显低于空白对照组和阴性对照组（P值均＜0.01）;Transwell侵袭实验结果显示，DDX5-shRNA组平均穿过膜的细胞数较空白对照组和阴性对照组明显减少，差异具有显著性（P值均＜0.01）。流式细胞实验显示，DDX5-shRNA1组和2组S期细胞所占百分比明显高于空白对照组和阴性对照组，与之对应的G0/G1、G2/M期比例相应降低，细胞阻滞在S期（P值均＜0.05）。Western Blot法研究结果显示，EMT分子vimentin、SNAIL及EGFR水平在DDX5-shRNA细胞中的表达水平不同程度下降。
　　结论:
　　DDX5表达下调能抑制ICC RBE细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并阻滞细胞生长周期于S期;DDX5可以通过EMT机制影响ICC的生物学特性。
　　第二章 DDX5在ICC免疫病理学诊断和临床预后评估中的意义
　　目的:
　　检测ICC组织中DDX5的表达情况，验证DDX5在ICC的诊断及鉴别诊断中的价值，并探讨DDX5的表达水平与ICC临床病理参数及预后之间的相关性。
　　方法:
　　收集2000年7月至2006年3月间我院手术切除并病理诊断为ICC的病例323例。通过查阅电子和纸质版病例档案，收集患者的年龄、性别、肿瘤大小、数目、有无肝硬化、有无微血管癌栓、TNM分期等病理资料。另取癌旁正常组织作为对照。将统计完整的病例录入Microsoft Excel并建立数据库，以此数据库为基础，利用SPSS19.0分析比较DDX5的表达水平与ICC临床病理参数之间的相关性，并对323例ICC预后进行评估。
　　结果:
　　DDX5阳性染色呈棕褐色或棕黄色，主要表达于癌细胞核及细胞质。323例ICC组织中170例DDX5表达阳性，阳性率为52.6％。DDX5在ICC组织中的表达水平明显高于正常胆管组织，统计结果有显著差异(P＜0.05)。对4类病变进行免疫组化分析，结果显示，高级别上皮内瘤变组织中DDX5的阳性率为40％(4/10)，假腺管型肝细胞癌组织中DDX5的阳性率为0％(0/10)，肝内转移性腺癌组织中DDX5的阳性率为50％(5/10)。ICC组织中DDX5的表达量与患者性别、血清ALP值有关(P＜0.05)，但与患者的年龄、肝硬化情况、肿瘤大小、TNM分期等无关(P＞0.05)。DDX5高表达组的总生存期(overall suvival，OS)明显差于低表达组（P=0.011），但与复发时间(time to recurrence，TTR)无关（P=0.555）。
　　结论:
　　DDX5作为ICC的一个新型肿瘤标志物，在ICC的诊断与鉴别诊断，以及评估ICC患者术后生存状况具有较大的实际应用价值。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 DDX5的表达调控对ICC生物学特性的影响及其可能机制

前言

一、材料与方法

(一)主要材料

(二)主要方法

二、结果

1．检测DDX5 shRNA慢病毒转染ICCRBE细胞后的表达量

2．DDX5低表达对ICC细胞增殖的影响

3．DDX5低表达对ICC细胞侵袭、迁移的影响

4．DDX5低表达对ICC细胞生长周期的影响

三、讨论

参考文献

第二章 DDX5在ICC中的鉴别诊断价值及与其临床病理特征及预后的关系

前言

二、材料与方法

(一)主要材料

(二)主要方法

(三)结果

三、讨论

参考文献

文献综述

在研期间同时开展的其他研究课题

在读期间发表论文和参加科研工作情况

致谢