载脂蛋白AI模拟肽D4F对小鼠肝脏脂肪样变和炎性的抑制作用

摘要

目的
　　本实验通过高脂饲料喂养建立与人类非酒精性脂肪性肝病(NALFD)发病过程相似的载脂蛋白E基因敲除（Apo E-/-）小鼠模型，观察载脂蛋白AⅠ(Apo AⅠ)模拟肽D4F对小鼠肝脏脂质代谢的影响，探讨Apo AⅠ模拟肽D4F对小鼠肝脏脂肪样变及炎性的干预作用并进一步探讨其可能的作用机制，为临床上对NALFD的药物治疗提供依据。
　　方法
　　24只8周龄雄性Apo E-/-小鼠，经过两周高脂(15.8％)与高胆固醇(1.25％)喂食后随机分为3组(n=8)，分别腹腔注射生理盐水（模型组）、紊乱模拟肽sD4F(1mg/kg·d，sD4F组)和ApoAⅠ模拟肽D4F（1 mg/kg·d，D4F组）。同周龄雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饮食并给予腹腔注射生理盐水作为正常对照组。6周后处死，ELISA法检测Apo E-/-及普通小鼠血浆中炎症因子TNF-α、IL-6的含量，并取小鼠肝脏组织，采用HE染色观察其病理形态的改变，同样采用油红O染色方法评估肝组织脂肪变性程度，免疫组织化学方法检测Apo E-/-及普通小鼠肝组织核因子-κB、TNF-α在肝脏中的表达与分布，同时采用Western Blotting方法检测肝组织中NF-κB、TNF-α的含量。实验数据采用SPSS13.0统计软件包进行统计，两组间比较采用单因素方差检验，实验数据以均数±标准差表示，P＜0.05认为差异有统计学差异。
　　结果
　　1.小鼠肝脏组织病理切片结果显示:光学显微镜下可见模型组及sD4F组小鼠的肝脏细胞中出现大量的脂质滴的累积，并伴有不同程度脂肪变性及小叶间炎性细胞的浸润;D4F组小鼠的肝脏细胞脂肪变性程度显著减轻，小叶间炎性细胞浸润明显减少，与对照组小鼠相比无明显差别。
　　2.对各组小鼠的血清细胞因子的检测结果显示:与对照组小鼠比较，模型组ApoE-/-小鼠血清TNF-α、IL-6的水平增高显著，并有统计学意义(P＜0.05);与模型组小鼠相比，D4F组血清TNF-α、IL-6的含量明显下降，分别为模型组的48.6％和63.4％，差异有统计学意义(P＜0.05); sD4F组与模型组比较各项指标无统计学差异。
　　3.免疫组化结果显示:TNF-α在正常组小鼠肝细胞胞浆内几乎无表达，而在模型组小鼠肝细胞胞浆内有显著表达(P＜0.05)，与模型组相比，D4F组肝细胞胞浆内TNF-α表达明显减少(P＜0.05)，较模型组减少42.4％; NF-κB在正常组小鼠肝细胞胞浆内有表达，在细胞核内几乎无表达，而在模型组小鼠肝细胞胞浆及胞核内均显著表达(P＜0.05)，与模型组相比，D4F组肝细胞胞核内NF-κB表达明显减少(P＜0.05)，为模型组的45.5％; sD4F组与模型组比较各项指标无统计学差异。
　　4.蛋白印迹结果显示:TNF-α在正常组小鼠肝组织内几乎无表达，而在模型组小鼠肝组织内有显著表达（P＜0.05），与模型组相比，D4F组肝组织内TNF-α表达明显减少(P＜0.05); NF-κB在正常组小鼠肝组织内有少量表达，在细胞核内几乎无表达，而在模型组小鼠肝组织内均显著表达(P＜0.05)，与模型组相比，D4F组肝组织内NF-κB表达明显减少(P＜0.05); sD4F组与模型组比较各项指标无统计学差异。
　　结论
　　高脂饮食引起Apo E-/-小鼠肝脏脂质沉积，并继发肝脏炎性改变;Apo AⅠ模拟肽D4F能够减少高脂饮食Apo E-/-小鼠肝脏脂质的沉积，同时能够减轻肝脏组织的炎性改变，说明D4F具有预防小鼠肝脏脂肪变性及炎性的作用;Apo AⅠ模拟肽D4F对小鼠肝脏脂肪样变及炎性变化的预防效能可能涉及抑制NF-κB通路的表达以及减轻炎症因子TNF-α、IL-6的释放。

目录

摘要

符号说明

前言

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

结果

1．小鼠一般情况的观察

2．小鼠肝脏标本大体观察

3．D4F对小鼠血浆中TNF-α及IL-6水平的影响

4．肝脏病理组织学观察

5．免疫组化结果

6．各组小鼠中肝组织匀浆中NF-κB、TNF-α含量的变化及D4F对小鼠肝脏NF-κB、TNF-α表达的影响

讨论

结论

附图表

参考文献

综述 非酒精性脂肪性肝病的研究进展

致谢

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