植入前期与分娩前期子宫差别基因筛选及IL-1β对胚泡植入前后子宫MMP2表达的影响

摘要

妊娠主要包括胚泡着床，妊娠的维持以及分娩等一系列重要的阶段。从免疫学角度来讲，母体子宫作为特殊的生殖免疫器官在胚泡着床和分娩时分别表现为免疫耐受和免疫排斥，这两个生理反转过程必然涉及基因的时空差别表达；胚泡植入又涉及大量细胞因子及基质金属蛋白酶的协同参与。研究这些关键过程将使我们对胚泡植入和分娩的分子机理获得进一步的认识，同时也可为器官移植、同种或异种克隆等研究热点提供基础理论依据，在临床上也为治疗一些妊娠疾病如不孕、流产、胎儿畸形等提供药物可能作用的靶位点。　　本文采用抑制消减杂交技术，以Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)为实验动物，选取妊娠过程中植入前期(第5d)和分娩前期(第19d)子宫分别作为驱动方和实验方，进行抑制消减杂交，获得的消减文库经差异筛选得到70个阳性克隆。序列测定和同源对比分析表明这些克隆所代表的基因在大鼠基因库中分别与8个已知基因有90﹪～100﹪不等的同源性。这些基因均差别表达于分娩前期子宫组织中，其中首次发现尿鸟苷蛋白和干扰素诱导蛋白16在SD大鼠妊娠子宫中有表达。RT-PCR及半定量分析显示尿鸟苷蛋白基因在妊娠第19d子宫中的表达显著高于妊娠第5d(P＜0.001)，而干扰素诱导蛋白16差异表达不明显。在妊娠第6d、第9d和第12d的子宫中尿鸟苷蛋白基因自胚泡植入后其表达逐渐上升，妊娠第15d下降，在妊娠第19d表达量最高。　　采用半定量RT-PCR、免疫组化等方法，对胚泡植入前后时期SD妊娠大鼠体内注射超生理剂量的白细胞介素1β(IL-1β)，检测处理前后妊娠子宫中基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达变化，探讨IL-1β对MMP2表达的影响。　　总之，本文利用SSH技术首次获得分娩前期子宫差别表达基因库，其中对尿鸟苷蛋白基因的进一步研究显示其可能与分娩有关，同时本文首次报导在胚泡植入前后IL-1β可明显抑制子宫腔上皮MMP2的表达。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明、导师承诺和关于论文使用授权的说明

第一部分文献综述

第一章筛选差别表达基因的方法

1差异显示PCR

2 RNA指纹技术

3消减杂交

4基因表达系列分析

5基因芯片法

6双向电泳技术

7噬菌体全套抗体库技术

8大量平行测序技术

9 小结

第二章基质金属蛋白酶家族及其生物学功能

1 MMPs的基本结构

2 MMPs的分类

3 MMPs活性的调节

4 MMPs的生物学功能

第二部分实验研究

第一章植入前期与分娩前期子宫差别基因筛选及表达

1材料和方法

2结果

3讨论

第二章IL-1β对胚泡植入前后子宫MMP2表达的影响

1材料和方法

2结果

3 讨论

结论

参考文献

致 谢

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