昆白小鼠卵母细胞激活与孤雌胚体外发育

摘要

昆白小鼠是我国自主繁殖的近交系小鼠，由于其遗传背景清楚、生殖周期短、环境适应能力强等优点，是国内良好的实验动物模型。本研究以昆白小鼠为研究对象，分离了子宫内膜上皮细胞，对卵母细胞的孤雌激活、孤雌胚胎的发育潜能进行了研究，探讨了影响孤雌激活和发育的几个因素，为孤雌胚胎干细胞的分离、建系提供一些基础。主要内容有以下几点： 1.37℃下2.5mg/mL胰蛋白酶+0.04％EDTA30min消化子宫内膜，结合刮取法，能获得活力高、数目多、细胞比较单一的子宫内膜上皮细胞，子宫内膜上皮细胞的活力随着细胞培养代数的增加而下降(噻唑蓝法检测)。 2.7％乙醇刺激小鼠卵母细胞，激活5～7min时其激活效果及孤雌胚发育较好，其桑囊胚发育率可达29.77％； 3.SrCl2激活小鼠卵母细胞时，6～10mmol/L为最佳处理浓度，3～6h为最佳激活时间，其桑囊胚发育率可达16.67％。 4.在复合激活中，7％乙醇激活5min在联合2mmol/L6-DMAP+5μg/mLCB激活3h效果最佳，其桑囊胚发育率高达35.77％。 5.添加15％FBS的CZB和mM16培养液均能较好地支持2-cell胚胎发育到囊胚(27.2％，26.3％)。同时，添加FBS的CZB和mM16组的囊胚发育率也均显著高于相应的添加BSA组(p＜0.01)。 6.15％FBS的CZB和mM16培养液进行孤雌胚培养时，胚胎在mM16培养液中仅有7.45％突破2-cell阻滞。但在CZB培养液中有41.66％能发育通过2-cell期并有29.17％到达桑囊胚。 7.昆明小鼠MⅡ卵母细胞激活后在含15％FBS的CZB培养液中可较好地克服2-cell阻滞并形成桑囊胚。在培养48h添加1.1mg/mL葡萄糖对胚胎的继续发育有利。 8.颗粒细胞、输卵管上皮细胞和小鼠子宫内膜上皮细胞与小鼠孤雌胚胎共培养24h，共培养组胚胎与对照组大部分都能进行分裂。而从2-cell期进入4～8-cell期，CZB与颗粒细胞共培养组的胚胎发育无差异，但输卵管、子宫内膜上皮细胞共培养的胚胎要稍好一些(49.12％，48.23％)。CZB培养的桑囊胚发育率(32.99％)略低于其它三个共培养组的胚胎发育率(36.84％,38.71％,38.82％)(p＜0.05)。因此，共培养细胞对孤雌胚的发育有一定的促进作用。

目录

文摘

英文文摘

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前言

第一章小鼠的饲养管理及卵母细胞激活培养

第二章不同化学激活剂对小鼠卵母细胞的激活效果

第三章孕鼠子宫内膜上皮细胞分离培养、培养及活力检测

第四章不同培养液及共培养体系对小鼠孤雌胚体外发育的影响

结论

参考文献

附表

致谢

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