不同添加物对牛卵母细胞体外成熟、核移植胚胎发育及牛卵母细胞冷冻后发育的影响

摘要

一、在卵母细胞成熟液中分别添加EGF、OCS、FBS、BFF和V<,E>；并通过胞质内注射法构建牛体细胞核移植胚胎，研究其对卵母细胞核成熟和胞质成熟的影响；结果如下： 1.在成熟液中添加EGF显著的提高了卵母细胞的成熟率(P<0.05)、极显著提高了核移植胚的卵裂率(P<0.01)和囊胚率(P<0.01)。 2.在成熟液中分别添加OCS(Od)和OCS(7d)，OCS(Od)组卵母细胞的成熟率极显著高于0CS(7d)组(P<0.01)；OCS(Od)组的卵裂率高于添加OCS(7d)组，但二者之间差异不显著(P>0.05)；OCS(Od)组的囊胚率极显著高于OCS(7d)组(P<0.01)。 3.在成熟液中分别添加OCS(Od)和FBS，OCS(Od)组卵母细胞的成熟率、核移植胚的卵裂率及囊胚率均极显著高于FBS组(P<0.01)。 4.在成熟液中分别添加5％BFF+5％FBS和10％BFF，5％BFF+5％FBS组卵母细胞的成熟率显著高于FBS组和10％BFF组(P<0.05)，10％组在核移植胚胎的构建过程中容易发生粘连现象，故胚胎未构建，5％+5％FBS组的卵裂率达到了84.61％，囊胚率达到了14.29％。 5.成熟液中添加V<,E>组卵母细胞的成熟率高于对照组，但差异不显著(P>0.05)；核移植胚胎的卵裂率和囊胚率均高于对照组，且差异极显著(P<0.01)。 二、在成熟液中分别添加EGF、OCS和V<,E>培养的卵母细胞和对照组卵母细胞分别冷冻保存，卵母细胞解冻后，应用形态正常率和体外受精胚的发育评价培养液各种添加物对卵母细胞的冷冻的影响。结果如下： 1.对照组和添加EGF组的卵母细胞形态正常率分别为71.9％和76.2％，差异不显著(P>0.05)，两组的卵裂率分别为63.4％和79.7％，差异显著(p<0.05)，两组的囊胚率分别为15.1％和30.3％，差异显著(p<0.05)。 2.对照组和添加OCS组的卵母细胞形态正常率分别为70.5％和75.7％，差异不显著(P>0.05)，两组的卵裂率分别为65.2％和81.4％，差异显著(p<0.05)，两组的囊胚率分别为13.3％和26.7％，差异显著(p<0.05)。 3.对照组和添加V<,E>组的卵母细胞形态正常率分别为73.9％和79.2％，差异不显著(P>0.05)，两组的卵裂率分别为60.8％和68.6％，差异不显著(P>0.05)，两组的囊胚率分别为14.1％和18.4％，差异不显著(P>0.05)。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

第一章哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究进展

1.1卵母细胞成熟的机理

1.1.1卵母细胞的发育

1.1.2卵母细胞成熟的分子机制

1.2卵母细胞成熟的特征

1.2.1生发泡破裂(GVBD)

1.2.2染色体凝集

1.2.3纺锤体形成

1.2.4极体排出

1.2.5透明带软化

1.2.6卵丘细胞扩展

1.3卵母细胞成熟的判断

1.4卵母细胞的获取与分级

1.4.1超数排卵采集

1.4.2活体卵巢上采集

1.4.3屠宰后卵巢上采集

1.4.4卵母细胞的分级

1.5影响卵母细胞体外成熟的因素

1.5.1卵母细胞来源

1.5.2体外成熟培养体系

1.6存在的问题和展望

第二章哺乳动物卵母细胞冷冻保存研究进展

2.1细胞冷冻生物学

2.1.1冷冻降温速度与冰晶损伤和溶质损伤

2.1.2冷冻过程对细胞的影响

2.1.3解冻过程对细胞的影响

2.2冷冻保护剂

2.2.1.渗透性冷冻保护剂

2.2.2非渗透性保护剂

2.2.3其他保护剂

2.3诱发结晶

2.4卵母细胞冷冻保存方法

2.4.1程序冷冻法

2.4.2玻璃化法

2.5冷冻保存对哺乳动物卵母细胞结构的影响

2.5.1对微管的影响

2.5.2对透明带的影响

2.5.3对超微结构的影响

2.5.4对染色体的影响

2.6影响卵母细胞冷冻保存效果的因素

2.6.1卵母细胞的特性

2.6.2冷冻保护剂对冷冻效果的影响

2.6.3冷冻方法

2.7哺乳动物卵母细胞冷冻保存技术展望

第三章不同添加物对牛卵母细胞体外成熟的影响

3.1材料与方法

3.1.1试剂、用品与仪器

3.1.2牛卵巢的采集、运输及牛卵母细胞的采集

3.1.3卯母细胞的体外成熟培养和成熟率检查

3.1.4试验设计及统计分析

3.2结果与分析

3.2.1 EGF对牛卵母细胞成熟的影响

3.2.2不同发情天数牛的血清对牛卵母细胞成熟的影响

3.2.3不同血清类型对牛卵母细胞成熟的影响

3.2.4不同浓度卵泡液对牛卵母细胞成熟的影响

3.2.5 VE对牛卵母细胞成熟的影响

3.3讨论

3.3.1 EGF对牛卵母细胞成熟的影响

3.3.2不同发情天数牛的血清对牛卵母细胞成熟的影响

3.3.3不同血清类型对牛卵母细胞成熟的影响

3.3.4不同浓度卵泡液对牛卵母细胞成熟的影响

3.3.5 VE对牛卵母细胞成熟的影响

3.4小结

第四章牛卵母细胞成熟对核移植胚胎发育的影响

4.2方法

4.2.1卵母细胞的去核操作

4.2.2供体细胞的准备和构建核移植胚胎

4.2.3核移植胚胎的激活

4.2.4核移植胚胎的体外培养

4.2.5数据统计分析

4.3结果与分析

4.3.1 EGF对牛核移植胚发育的影响

4.3.2不同发情天数牛血清对核移植胚发育的影响

4.3.3不同血清对核移植胚发育的影响

4.3.4牛卵泡液对核移植胚发育的影响

4.3.5 VE对牛核移植胚发育的影响

4.4讨论

4.4.1 EGF对牛核移植胚发育的影响

4.4.2不同发情天数牛的血清对牛核移植胚发育的影响

4.4.3不同种类血清对牛核移植胚发育的影响

4.4.4 BFF对牛核移植胚发育的影响

4.4.5 VE对牛核移植胚发育的影响

4.5小结

第五章不同添加物对牛卯母细胞冷冻保存后发育的影响

5.1材料

5.1.1牛卵巢和精液

5.1.2试剂及仪器

5.1.3牛卵母细胞采集和成熟培养

5.1.4程序冷冻液和解冻液

5.2方法

5.2.1卵母细胞的程序冷冻和解冻

5.2.2体外受精

5.3冷冻效果的评价

5.3.1形态正常率统计

5.3.2成熟率统计

5.4数据统计分析

5.5结果与分析

5.5.1成熟培养液中添加EGF对牛卵母细胞冷冻和体外受精胚胎发育的影响

5.5.2成熟液中添加不同种类血清对卵母细胞冷冻和体外受精胚发育的影响

5.5.3成熟液中添加VE对牛卵母细胞冷冻和体外受精胚胎发育的影响

5.6讨论

5.6.1成熟培养液中添加EGF对牛卵母细胞冷冻和体外受精胚胎发育的影响

5.6.2成熟液中添加不同种类血清对牛卵母细胞冷冻和体外受精胚发育的影响

5.6.3成熟液中添加VE对牛卵母细胞冷冻和体外受精胚胎发育的影响

5.7小结

结论

下一步研究计划

参考文献

附录

致谢

个人简介