广东“猪高热病”猪群中PRRSV及PRV的流行病学监测

摘要

2001年以来，我国大部分养猪密集地区都会出现“猪无名高热症”，该病发病率和死亡率都很高，并且发病迅速，对养猪业造成了极大的危害。2006年6月份以来在我国南方主要养猪省份都爆发了该病。该病的病原复杂，至今尚存在争议。本研究就此开展工作，获得以下结果： 1.初步弄清了2004-2006年期间广东省4个地区PRRS和2005-2007年期间广东省4个地区猪伪狂犬病分布以及流行特点。 2.分别采用培养的犬肾细胞(MDCK)、猪肾细胞系(PK-15)、仓鼠肾细胞系(BHK-21)、非洲绿猴肾细胞(Mare-145)分离到了1株PRV野毒及4株PRRSV毒株；对4株PRRSV分离株的高变区E片段基因进行的分子克隆证明它们均在基因水平发生了变异；动物试验发现，分离到的PRV野毒株在昆明系小鼠上引起的症状比在猪引起的临床症状更为典型。但该毒株攻击猪后所产生的病理组织变化很典型。这些结果表明，广东省“猪无名高热”不是由单一病毒引起的疾病。 3.克隆到了PRV GDSH株gE基因，对其进行了测序。该序列与GeneBank上公布的gE基因序列比对分析表明，PRV GDSH株gE基因序列与Ea株亲缘关系为99.9％。；克隆到了4株PRRSV广东分离株E片段基因，对其进行了测序。该序列与GeneBank上公布的E片段基因序列比对分析表明，4株PRRSV广东分离株均发生了变异，但从遗传进化树看四株PRRSV广东分离株并未发生较大程度的偏离，它们均来自同一分支。

目录

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论文说明：缩略语及中英文对照

声明

文献综述第一章猪高热病的研究进展

1.1猪高热病的临床症状

1.2猪高热病的流行和分布

1.3猪高热病的研究现状

1.4猪群中常见的病毒病

1.4.1猪生殖与呼吸系统综合征

1.4.2猪伪狂犬病

1.5猪群中常见病毒病流行现状

1.6本研究的研究背景、研究目的及意义

试验研究第二章猪高热病猪群中PRRSV和PRV的分子生物学调查

2.1材料与试剂

2.1.1血清

2.1.2试剂

2.2方法

2.2.1病料RNA的提取

2.2.2引物合成

2.2.3 PCR扩增

2.2.4猪伪狂犬病病毒gpI抗体检测

2.3结果

2.3.1 PCR检测结果

2.3.2样品采集和样品检测结果

2.3.3猪伪狂犬病病毒gpI抗体检测

2.4讨论

2.5 小结

试验研究第三章南方部分省区猪无名高热病病毒的分离鉴定

3.1材料与试剂

3.1.1材料

3.1.2主要仪器

3.1.3主要试剂

3.2方法

3.2.1病毒的分离

3.2.2病毒的鉴定

3.3结果与分析

3.3.1病毒分离结果

3.3.2 TCID50测定及中和试验结果

3.3.3病毒的泛嗜性结果

3.3.4 PRV gD基因的PCR扩增

3.3.5动物回归试验

3.3.6病理组织学检测结果

3.3.7 PRV gE基因的PCR扩增结果

3.3.8重组质粒的酶切结果

3.4讨论

3.5小结

试验研究第四章广东省猪伪狂犬病毒(PRV)GDSH株的GE基因及PRRSVE基因的克隆与序列分析

4.1材料

4.1.1宿主菌、质粒

4.1.2主要仪器

4.1.3主要药品及试剂

4.2方法

4.2.1目的片段的扩增、纯化与回收

4.2.2目的基因的克隆

4.2.3序列分析

4.2.4 PCR产物与pMD18-T载体的连接

4.2.5感受态细胞的制备

4.2.6连接产物的转化

4.2.7重组质粒的提取与鉴定

4.3结果

4.3.1gE基因的PCR扩增

4.3.2重组质粒的筛选结果

4.3.3测序结果及核苷酸序列同源性分析

4.4讨论

4.5 小结

结论

参考文献

致谢

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