RPW8.2转基因葡萄生物学特性观察及白粉病抗性评价

摘要

目前世界上广泛栽培的欧洲葡萄抗真菌能力差，尤其容易感染白粉病。利用基因工程技术提高葡萄的抗病性是葡萄分子育种的重要方向之一。课题组在前期研究中将拟南芥广谱抗性基因RPW8.2转到欧洲感病葡萄‘无核白’中，在室内接种白粉菌，转基因葡萄提高了对白粉菌的抗性。本研究是在前期研究的基础上，将该转基因葡萄栽植于塑料大棚中，观察转基因葡萄的生长特性，检测其对白粉病的抗性。主要结果如下： 1. RPW8.2基因在转基因无核白葡萄中的表达并未影响植株的生物学特性；转基因与野生型植株的物候期时间差控制在5天以内；两周内的枝条伸长量差值控制在4 cm左右。 2.对扦插苗和离体叶片接种葡萄白粉菌NAFU1，在温室中接种7 d后，在光照培养箱接种3、5、7、14 d后，台盼蓝染色，观察菌丝生长。结果表明，野生型植株叶片上的白粉菌菌丝长度、孢子梗数均为转基因植株的2倍以上，吸器健康、饱满，但在转基因植株叶片上吸器发育不良、颜色变深。白粉菌菌丝在转基因植株上的生长受到了抑制，转基因葡萄对白粉菌NAFU1的抗性高于野生型植株。 3.转基因葡萄自然感染白粉菌15 d后，对叶片进行台盼蓝和DAB染色并统计孢子量。结果表明，转基因植株叶片上的孢子量为野生型植株的35%，而野生型植株上的过氧化氢积累量仅为转基因植株的20%。这表明转基因葡萄是通过积累大量过氧化氢从而抑制白粉菌生长，与转基因拟南芥和转基因葡萄室内接种结果一致。 4.在自然感病情况下，对野生型无核白葡萄进行抗病分级，其感病指数为 32.85，抗病程度为4级，表现为感病类型。转基因葡萄的感病指数分布在3~21之间，抗病程度为2级和3级。这表明在自然感病情况下转基因葡萄对白粉菌抗性强于野生型植株。

目录

声明

第一章 文献综述

1.1 葡萄白粉病的研究概况

1.2 葡萄抗病育种研究进展

1.3 葡萄转基因育种研究进展

1.4外源基因在转基因植物中表达的研究

1.5 植物广谱抗病基因RPW8.2研究进展

1.6 本研究的内容、目的和意义

第二章 材料与方法

2.1 材料

2.2方法

第三章 结果与分析

3.1 转基因葡萄株系PCR检测

3.2转基因葡萄株系Western Blot分析

3.3 葡萄物候期观察

3.4葡萄生长特性观察

3.5转基因葡萄扦插苗白粉病抗性评价

3.6转基因葡萄离体叶片白粉病抗性评价

3.7转基因葡萄白粉病抗性评价

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

致谢

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