陕西和青海两个藏香猪场三种肠道原虫的感染情况与基因型研究

摘要

隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）、蓝氏贾第虫（Giardia duodenalis）和毕氏肠微孢子虫（Enterocytozoon bieneusi）是三种重要的机会性肠道寄生病原，这三种主要原虫均可感染多种动物和人类，严重影响动物的生产性能并危害人类健康。藏香猪是一种重要的经济动物，目前，在陕西省和青海省均有饲养。了解藏香猪隐孢子虫、蓝氏贾第虫和毕氏肠微孢子虫的感染以及基因型分布情况，可为研究和防控藏香猪常见肠道原虫病提供基础资料和数据依据。本研究共采集分别来自陕西和青海的两个藏香猪场的新鲜粪便样品450份（216份采自陕西某藏香猪场，234份采自青海某藏香猪场），利用套式PCR技术分别对藏香猪隐孢子虫、蓝氏贾第虫以及毕氏肠微孢子虫的感染种类、基因型以及流行情况进行检测与分析，获得以下结果： 1.基于隐孢子虫的特异性基因位点18S rRNA基因，采用套式PCR扩增技术对藏香猪粪便样品进行检测。结果显示，两个藏香猪场隐孢子虫的总感染率为14.22%（64/450），其中，青海某藏香猪场的感染率为23.93%（56/234），陕西某藏香猪场的感染率为3.70%（8/216），两个猪场之间的隐孢子虫感染率呈现极显著差异（P<0.001）；断奶仔猪（1～4月龄）的感染率最高（42.86%，15/35），其次为育肥猪（4～12月龄），感染率为17.69%（49/277），在哺乳仔猪（小于1月龄）和成年猪（大于12月龄）两个猪群中未检测到阳性样品。断奶仔猪与育肥猪的隐孢子虫感染率在统计学上差异显著（P<0.05），且64份阳性样品检出的隐孢子虫种类均为Cryptosporidium scrofarum。 2.利用特异性基因位点bg、tpi以及gdh，对藏香猪感染蓝氏贾第虫的情况进行分子检测，结果显示，两个藏香猪场的蓝氏贾第虫总感染率为6.22%（28/450），其中陕西某藏香猪场的感染率为6.02%（13/216），青海某藏香猪场的感染率为6.41%（15/234），两个藏香猪场之间在统计学上差异不显著（P>0.05）；哺乳仔猪的感染率为26.83%（11/41）、断奶仔猪的感染率为5.71%（2/35）、育肥猪的感染率为5.05%（14/277）、成年猪的感染率为1.03%（1/97），各年龄段之间差异极显著（P<0.001），且感染率随年龄的增长呈现下降趋势。基于gdh基因的DNA序列比对结果显示，藏香猪中存在有动物宿主特异性集聚体E和人畜共患集聚体B共两种基因型。基于bg、tpi和gdh基因位点的集聚体E多位点序列分型结果显示，仅有1份样品在3个位点均扩增成功，构成1个MLGs并命名为MLG E1。 3.利用毕氏肠微孢子虫的特异性基因位点SSU rRNA，对藏香猪的毕氏肠微孢子虫流行情况进行分子检测，结果显示，两个藏香猪场毕氏肠微孢子虫的总感染率为48.44%（218/450）。其中，青海某藏香猪场毕氏肠微孢子虫的感染率为65.81%（154/234），陕西某藏香猪场的感染率为29.63%（64/216），两个藏香猪场之间呈现极显著差异（P<0.001）；哺乳仔猪、断奶仔猪、育肥猪以及成年猪毕氏肠微孢子虫的感染率分别为92.68%（38/41）、51.43%（18/35）、55.23%（153/277）和9.27%（9/97），各年龄段之间呈现极显著差异（P<0.001）。基于SSU rRNA基因位点对所有样品进行基因型分析，结果共检出有5个基因型，分别命名为Type1～5，其中Type1为优势基因型。利用多位点序列分型技术对218份阳性样品进行分析，在MS1、MS3以及MS4三个位点共得到6个MLGs，分别命名为MLG1～6。

目录

声明

文献综述

1.1 三种原虫的生物学特性、虫种/基因型

1.2 三种原虫的分子检测及其在猪体中的流行情况

1.3 本研究的目的和意义

试验研究

第二章 陕西和青海两个藏香猪场隐孢子虫的感染情况调查

2.1材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

第三章 两个藏香猪场蓝氏贾第虫的感染情况和多位点基因分型研究

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 小结

第四章 两个藏香猪场毕氏肠微孢子虫的感染情况和多位点基因分析研究

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 讨论

4.5 小结

结论

参考文献

致谢

个人简历