促进植物内生真菌Y菌株过量产生紫杉醇的研究

摘要

该文以产紫杉醇植物内生真菌Y<,3>菌株为出发菌株,对菌体的生长代谢以及碳源,前体(苯丙氨酸、酪氨酸、乙酸铵)和过氧化氢对生物量、紫杉醇含量的影响进行了研究.并对发酵提取物内的紫杉醇用TLC、HPLC、毛细管电泳和MALDI-TOF进行了定性定量分析.结果表明Y<,3>菌株的最适碳源为葡萄糖;苯丙氨酸的添加浓度为100mg/L,酪氨酸的添加浓度为9mg/L,乙酸铵的添加浓度为20mg/L;过氧化氢对Y<,3>菌株产紫杉醇有明显的促进作用,当以8h为时间间隔,添加浓度为8mmol/L时,紫杉醇的含量可达700μg/L,比对照提高9倍以上.另外,对Y<,3>菌株作了初步鉴定,经鉴定其为国内外首次报道的产紫杉醇.

目录

独创性声明

Abstract

第一部分概述

1.紫杉醇的研究进展

1.1紫杉醇的化学结构及构效关系

1.2抗肿瘤机理的研究进展：

1.3生物合成的研究进展

1.4紫杉醇合成的相关酶类

1.5生产途径的研究进展

1.6紫杉醇分离、纯化的研究进展

2.紫杉醇的研究趋势及亟待解决的问题

第二部分材料与方法

1.实验材料

1.1菌种：

1.2培养基：

1.3试剂及溶液

1.4仪器

2.实验方法

2.1菌株的活化

2.2培养方法

2.3还原糖测定：

2.4 pH值的测定

2.5菌体生物量的测定

2.6紫杉醇的提取方法

2.7紫杉醇检测

2.8过氧化氢的滴定[113]：

2.9 Y3菌株的扫描电镜观察

第三部分结果与讨论

1.菌体的繁殖及代谢规律

2.摇瓶发酵试验

2.1最佳碳源的选择

2.2最适培养温度的选择

2.3最适pH的选择

2.4摇瓶最佳装液量的选择

2.5代谢前体物的筛选

3.小型发酵罐试验

3.1接种量和接种龄的选择

3.2发酵罐溶氧控制

4.促使Y3菌株紫杉醇过量产生的实验技术

4.1添加紫杉醇的生物合成前体

4.2分批补料技术

4.3 H2O2在提高紫杉醇过量产生中的作用

5.紫杉醇的检测：

5.1定性检测

5.2定量检测

6.菌种的培养性状和鉴定

小结

参考文献

致 谢