一株用于生物防治的Burkholderia菌的基因改造和生长条件研究

摘要

Burkholderia菌是一种能够对抗真菌病害的新型生物农药，它能产生多种抗生素对付真菌感染。现从土壤中分离出一株BurkholderiaKDMD。根据PseudomonasaeruginosahcnABC基因序列设计引物，扩增出hcnABC基因的2.1kb片段和1.6kb片段。然后用BamHⅠ和PstⅠ双酶切2.1kb片段和Pucp26质粒，将2.1kb片段连接到Pucp26质粒上，因为Pucp26含有LacZ基因，所以用蓝白选择法筛选出阳性单菌落，酶切检验；接着用HindⅢ和PstⅠ双酶切1.6kb片段和上一步连接好的Pucp26质粒，组成完整的hcnABC基因。培养基选用LB培养基，pH值调为7.0，温度分别选用25℃、30℃、37℃和42℃，摇床转速为200r/min，每隔2小时测量一次OD600值，绘制BurkholderiaKDMD不同温度的生长曲线，确定37℃为最佳培养温度；培养基选用LB培养基，温度选用37℃，pH值分别选用pH4.5，pH5.0，pH5.5，pH6.0，pH6.5，pH7.0，pH7.5，pH8.0，pH8.5，每隔2小时测量一次OD600值，绘制KDKD不同pH值的生长曲线，确定pH6.0最佳pH值；选用M9作为基本培养基，氮源选用0.1％的酵母粉，碳源选用1％蔗糖、葡萄糖、果糖、乳糖和淀粉，37℃，pH7.0条件下培养，每隔2小时测量一次OD600值，绘制BurkholderiaKDMD不同碳源的生长曲线，确定蔗糖为最佳碳源；选用M9作为基本培养基，碳源选用1％的葡萄糖，氮源分别选用酵母粉、蛋白胨、NH4Cl、NaNO3，37℃，pH7.0条件下培养，绘制不同氮源的生长曲线，确定酵母粉是最佳氮源。在土豆培养基上用滤纸片法测量BurkholderiaKDMD的菌液对4种真菌的抑制作用，发现对马铃薯干腐(Pythiumsolani)的抑制作用最大，其次为西瓜枯萎、烟草赤星和小麦赤霉。用CAS培养基测定出BurkholderiaKDMD产生少量铁螯和蛋白，用苦味酸溶液测定出BurkholderiaKDMD不产生HCN气体。用BurkholderiaKDMD和小麦赤霉的混合液喷洒小麦幼苗，发现与只喷有小麦赤霉的小麦相比，BurkholderiaKDMD对小麦赤霉有抑制作用。

目录

文摘

英文文摘

西北大学学位论文知识产权声明书及西北大学学位论文独创性声明

第一章前言

第二章hcnABC基因的克隆

第三章Burkholderia KDMD生长条件的测定

第四章抗菌图谱和活性物质的鉴定及盆栽实验

第五章讨论

参考文献

致 谢