壳聚糖-海藻酸盐微球荧光标记反应研究

摘要

生物相容性、降解性优良的壳聚糖/海藻酸盐微球载体技术成为蛋白质药物口服给药系统发展的前沿。为了研究壳聚糖/海藻酸钙微球在体内的转运、吸收与分布状况，可以采用肝、脾等组织切片及血流变测试进行定性与定量考察。但是由于壳聚糖、海藻酸钠没有明显的颜色，微球在体检测存在一定的困难。因此采用特定化合物．荧光素对微球进行标记，通过标准仪器检测荧光素达到对壳聚糖/海藻酸盐微球在体检测目的。 本文采用异硫氰酸酯(FITC)为荧光标记物，利用碱性条件下壳聚糖2-NH2中氮原子与FITC异硫氰基上正电性碳原子发生亲核加成反应，使壳聚糖分子结合FITC。随后，以海藻酸钙微球为载药基质，在酸性条件下海藻酸钙5-COO。与荧光壳聚糖2-NH<,3><'+>进行聚电解质络合反应，微球表面形成键合FITC的半透性控释膜，实现微球的荧光标记。系统考察影响微球荧光标记的相关因素，得出优化工艺条件。采用膨胀率表征微球膜强度，探讨壳聚糖相关特性、反应条件对荧光微球在口服介质中膜强度的影响。实验结果如下： 1．壳聚糖溶液pH值对荧光标记反应具有决定性作用。当溶液pH>pKa(壳聚糖)时，壳聚糖荧光标记效率显著提高。 2． FITC上带正电性的碳原子与海藻酸钙凝胶珠上5-COO<'->共同竞争壳聚糖的2-NH<,2>，因此壳聚糖的荧光标记程度对微球的荧光标记反应有一定的负面影响。同时壳聚糖分子量、脱乙酰度、浓度、成膜时间以及海藻酸钙凝胶珠粒径对微球荧光标记反应影响显著。采用5万分子量、脱乙酰度90％、溶液浓度0.01g/mL的壳聚糖结合FITC后，与小粒径海藻酸钙凝胶珠发生10min成膜反应，将得到标记效率较高的荧光微球。 3．研究发现采用小分子量、低脱乙酰度的壳聚糖，较高的成膜液浓度以及增加成膜时间有利于提高荧光微球在口服相关介质中的稳定性。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1研究背景

1.1.1蛋白质药物应用现状及前景

1.1.2蛋白质药物非注射给药途径研究现状

1.2壳聚糖/海藻酸盐微球在体检测中存在的问题及解决方法

1.2.1在体检测存在的问题

1.2.2解决在体检测问题的方法

1.3论文研究思路

1.4论文工作设想

第二章壳聚糖的荧光标记反应研究

2.1实验

2.1.1材料

2.1.2仪器

2.1.3方法

2.2结果与讨论

2.2.1壳聚糖与FITC荧光标记反应原理

2.2.2 FITC标记的壳聚糖形态

2.2.3壳聚糖溶液pH值对荧光标记反应的影响

2.2.4荧光标记反应时间对壳聚糖标记反应的影响

2.2.5壳聚糖溶液浓度对壳聚糖标记反应的影响

2.2.6壳聚糖分子量对壳聚糖荧光标记反应的影响

2.2.7壳聚糖脱乙酰度对壳聚糖标记反应的影响

2.2.8小结

第三章荧光标记微球反应研究

3.1实验

3.1.1材料

3.1.2仪器

3.1.3方法

3.2结果与讨论

3.2.1荧光壳聚糖与海藻酸钙凝胶珠反应原理

3.2.2标记了FITC的壳聚糖/海藻酸钙微球形态

3.2.3微球解聚原理

3.2.4荧光微球解聚液紫外分析结果

3.2.5成膜反应时间对微球标记反应的影响

3.2.6壳聚糖分子量对微球荧光标记反应的影响

3.2.7壳聚糖溶液浓度对微球标记反应的影响

3.2.8壳聚糖脱乙酰度对微球标记反应的影响

3.2.9凝胶珠粒径对微球荧光标记反应的影响

3.2.10氯化钙溶液浓度对微球荧光标记反应的影响

3.2.11海藻酸钠溶液浓度对微球荧光标记反应的影响

3.2.12小结

第四章荧光微球体外稳定性实验

4.1实验

4.1.1材料

4.1.2仪器

4.1.3方法

4.2结果与讨论

4.2.1标记上FITC的壳聚糖体外稳定性

4.2.2空白微球与荧光微球在模拟胃、肠液中稳定性对比实验

4.2.3壳聚糖分子量对荧光微球在模拟胃、肠液中稳定性的影响

4.2.4壳聚糖溶液浓度对荧光微球在模拟胃、肠液中稳定性的影响

4.2.5壳聚糖脱乙酰度对荧光微球在模拟胃、肠液中稳定性的影响

4.2.6成膜液浓度对荧光微球在模拟胃、肠液中稳定性的影响

4.2.7成膜时间对荧光微球在模拟胃、肠液中稳定性的影响

4.2.8小结

第五章总结

5.1结论

5.2创新点

5.3不足及后续研究工作建议

参考文献

附录

致 谢

作者简历/硕士期间撰写和发表的文章如下：