晚期NSCLC患者XPG、MDR1基因单核苷酸多态性与铂类药物短期化疗疗效的关系

摘要

肺癌是一种严重威胁人类健康的恶性肿瘤，近年来发病率呈上升趋势，世界范围内每年新增患者人数为120万。临床上80％以上为非小细胞肺癌(NSCLC)，其中超过半数以上的肺癌在就诊时已属晚期，失去了手术的机会，治疗的主要手段就是以化疗为主的综合治疗。迄今NSCLC的化疗方案仍以含铂方案为主。不同的患者对化疗药物往往表现出不同程度的耐药性，是导致肺癌化疗失败的重要原因之一。 随着药物遗传学以及药物基因组学的发展，人们对于肺癌的耐药性做了大量的研究并有了初步的认识。人体细胞内多药耐药基因以及DNA修复基因的表达是导致机体对铂类化疗药物产生耐药的主要原因，而不同的患者所表现出来的对铂类化疗药物不同程度的敏感性，可能与人体细胞内DNA修复基因及多药耐药等相关基因的单核苷酸多态性有关。人体内DNA修复基因主要包括ERCC和XRCC两大类，其中ERCC1，ERCC2,XRCC1基因多态性与铂类化疗药物的敏感性的关系已经得到了相关实验的证实；而铂类药物作为多药耐药基因MDR1所编码的P-gp蛋白的作用底物之一也得到了证明。 研究目的： 因为DNA修复基因XPG在DNA损伤修复过程中具有重要的作用，并且其多态位点C3507G已经被证实与NSCLC的易感性有关：多药耐药基因MDR1的多态位点MDR1 C3435T及MDRl G2677T与P-gp的表达水平存在密切的关系，同时P-gp与NSCLC患者接受铂类化疗的疗效之间的关系也得到了证实。本实验的的研究目的就是拟采用PCR-RFLP分析技术与统计学的方法相结合的方法，探讨DNA修复基因XPG多态位点XPG C3507G以及多药耐药基因MDR1的多态位点MDRl C3435T及MDR1 G2677A/T与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者对铂类为主化疗方案的敏感性的关系。以期为今后NSCLC实现个体化治疗奠定基础。 研究方法： ●研究对象的选择经病理确诊的晚期NSCLC患者101例，且在化疗过程中均采用以DDP为主的化疗方案。 ●基因型的分析在晚期NSCLC患者接受化疗之前抽取外周静脉血2ml，以及小部分病人的少量肺癌组织，采用Blood DNA Kit提取患者血液基因组DNA，用Trizol法提取组织DNA，以基因组DNA为模板PCR扩增含有多态位点XPG C3507G以及多态位点MDRl C3435T与G2677A/T的DNA片段，然后利用特定的限制性内切酶对含有突变碱基的DNA片段进行酶切，分析其基因型。 ●临床疗效的评价对所有的晚期NSCIC患者在经过2-3个化疗周期后按照WHO标准进行临床疗效评价。 ●统计学分析 采用SPSS软件进行数据分析。以X<'2>检验对不同基因型之间的化疗疗效差异进行分析，当出现期望值<5时用Fisher精确概率法进行计算。以比值(OR)及95％可信区间(CI)表示各种基因型与疗效的相关性。全部检验均为双侧检验，P<0.05为差异有显著性。 研究结果： MDR1 C3435T型为C/C者的化疗有效率为59.3％，显著高于至少含有一个T等位基因者26.5％(OR=0.442，95％CI=0.133-1.467，P<0.05))；MDR1G2677A/T位点至少一个T等位基因者的化疗有效率为13.0％，要显著低于其他基因型者的57.9％(OR=0.384，95％CI=0.187-0.789， P<0.01)，同时携带MDR1 C/T3435T和MDR1 T/G2677T基因型的患者中，化疗的有效率9.0％显著低于携带其他基因型组别的患者(OR=0.513，95％CI=0.293-0.897，P<0.05)；XPG C3507位点各基因型间化疗有效率差异无统计学意义。 结论： 在汉族人群中MDR1 C3435T和G2677A/T多态性与非小细胞肺癌患者应用铂类药物化疗的敏感性之间的关系有着显著的统计学意义。XPG C3507G位点多态性与铂类药物化疗的敏感性没有明显的相关性。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

摘要

第一部分：绪论

1.肺癌的发病及治疗情况

2.药物基因组学

3.DNA损伤修复系统

4.肺癌的多药耐药

5.单核苷酸多态性及其检测技术

第二部分：XPG基因C3507G多态性与晚期非小细胞肺癌对铂类药物化疗敏感性的研究

1.材料和方法

1.1研究对象

1.2化疗方案及疗效评价

2.实验方法

2.1主要仪器

2.2主要试剂

2.3血液DNA的提取

2.4引物的设计

2.5 XPG基因的PCR扩增

2.6 XPG基因型分析

3.数据统计方法

4.结果

4.1研究对象的均衡性检验

4.2遗传平衡检验

4.3化疗疗效评价

4.4 XPG基因型的分布

4.5 XPG C3507G基因型与化疗疗效的关系

5.讨论

第三部分：MDR1基因C3435T、G2677A/T多态性与晚期非小细胞肺癌对铂类药物化疗敏感性的研究

1.材料和方法

1.1研究对象

2.实验方法

2.1主要仪器

2.2主要试剂

2.3血液DNA的提取

2.4引物的设计

2.5 MDR1基因的PCR扩增

2.6 MDR1基因型分析

3.数据统计方法

4.结果

4.1研究对象的均衡性检验以及化疗疗效的评价同第一部分

4.2遗传平衡检验

4.3 MDR1 C3435T、MDR1 G2677A/T基因型的分布

4.4 MDR1 C3435T、MDR1 G2677A/T基因型与化疗疗效的关系

4.5 MDR1 C3435T、MDR1 G2677A/T两个位点基因型组合与化疗疗效的关系

5.讨论

结论

参考文献

附录

综述：细胞色素p450与肺癌的关系研究进展

在学期间已(待)发表的文章

致谢