小细胞肺癌外周血癌细胞的动态定量研究

摘要

背景与目的： 恶性肿瘤的复发转移主要是通过淋巴及血液系统播散。癌细胞从原发部位侵入血管或淋巴管，在循环中播散并存活，之后循环的肿瘤细胞（circulatingtumor cell，CTC）落户到其它部位或器官继续生长，形成转移灶。RT-PCR技术用于血液循环肿瘤细胞的检测已有多年历史，但仅限于定性研究。小细胞肺癌（SCLC）是极具侵袭性的恶性肿瘤，早期即有播散，治疗完全缓解者在未来也几乎无一例外地复发或转移，表明在完全缓解后，播散的癌细胞依然存在。如能动态定量检测血液中播散癌细胞对了解SCLC转移的时间、治疗后残留癌细胞数量水平及与复发和转移之间的量化对应关系有重要价值。前胃泌素释放肽原（preproGRP）在SCLC组织及细胞株中100％表达，但在正常人外周血中不表达，是一种理想的RT-PCR法检测血播散SCLC细胞的靶基因。免疫磁珠法分离外周血上皮来源的细胞作为CTC标记是一项新技术。我们将两项新技术用于SCLC患者，比较两者检测CTC的敏感性和稳定性，同时定量、动态监测小细胞肺癌（SCLC）患者外周血CTC的数量，分析SCLC血行转移的的规律、治疗后潜伏癌细胞与复发转移的量化对应关系。 方法： 设计preproGRP特异性引物和探针，建立检测preproGRP mRNA的定量RT-PCR方法。通过细胞掺入法评价检测的敏感性。用免疫磁珠法（MACS）分离纯化外周血循环癌细胞，结合形态学诊断计数细胞，通过细胞掺入法评价检测的敏感性。选择16例局限期（LD）和17例广泛期（ED）SCLC患者测定其血液循环癌细胞的数量，分析SCLC癌细胞血液播散的规律、化疗前后血液癌细胞的数量与疗效、复发转移及预后的关系。 结果： 1．免疫磁珠法（MACS）分离外周血癌细胞的敏感性：在一定范围内，分离率基本一致，为30％左右。分离细胞数量与掺入数量成正比，检出下限：5个细胞/ml全血。 2．preproGRP在细胞株、SCLC组织和健康人外周血的表达：5个SCLC细胞株全部表达preproGRP，16例SCLC组织中15例表达，健康人外周血全部阴性。表明preproGRP可以作为标记物用于SCLC外周血循环癌细胞的检出。 3．preproGRP定量RT-PCR对外周血SCLC细胞分析的敏感性为0．64个细胞/反应，检出下限：50个细胞/ml全血，低于MACS，但通过Ct值计算的细胞数与实际细胞数符合程度（80％左右）高于MACS法。 4．SCLC患者外周血癌细胞的检出率，广泛期检出率显著高于局限期。LD和ED期患者外周血癌细胞阳性患者检出的细胞数量，LD期患者为57±103，ED期患者为316±512，两者采用几何均数比较，p<0．05。 5．16例LD期SCLC患者中，5例外周血循环癌细胞阳性者，中位生存期为11．5个月。11例外周血循环癌细胞阴性者，中位总生存期为17．5个月。两者有显著差异。17例ED期SCLC患者中，10例外周血循环癌细胞阳性者中位生存期为9个月，7例外周血循环癌细胞阴性者为13个月。两者也有显著差异。 6．动态监测表明化疗可致外周血循环癌细胞数短暂升高，随后下降，转移后外周血循环癌细胞数升高。 结论： 1．preproGRP定量RT-PCR和MACS在检测SCLC患者循环癌细胞方面各有优缺点，MACS敏感性更高，适合循环癌细胞每毫升全血少于50个的检测，preproGRP定量RT-PCR计算的细胞数更符合实际情况。 2．SCLC患者循环癌细胞的数量与分期关系密切，广泛期检出率显著高于局限期。循环癌细胞阳性的LD期及ED期SCLC患者治疗后中位生存期分别短于循环癌细胞阴性患者。 3．动态监测SCLC患者外周血循环癌细胞数有助于监控病情发展。

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引言

1.材料和方法

2.结果

讨论

参考文献

综述 血液循环癌细胞检测及临床意义

攻读硕士学位期间的研究成果

致谢