冬虫夏草人工培养条件及有效活性成分研究

摘要

冬虫夏草是我国名贵的中药材,而蛹虫草是第一个能完全实现人工栽培的虫草属真菌。实现蛹虫草的大规模培养是解决虫草资源匮乏的有效途径之一。本实验从实验室保藏的三株蛹虫草菌株出发,对蛹虫草的人工培养及有效成分分析做了如下工作:
　　1.以蛹虫草菌丝形态,及液体和固体发酵能力为指标,对实验室保藏的三株菌株进行筛选,得到 C3菌株的菌丝生长健壮、液体和固体发酵能力优良。因此,将 C3菌株作为实验菌株。
　　2.实验发现,蛹虫草菌株极易退化,退化后的菌株表现出液体发酵副产物增多、固体发酵周期延长及固体发酵不产子实体等现象。本实验从常规保藏方法入手,得到保藏蛹虫草的最佳培养基为PDA培养基,于4℃低温保藏时间不宜超过4个月,4个月后就要活化一次,活化传代次数不宜超过4代。
　　3.通过对蛹虫草液体发酵培养基和发酵条件的单因素实验和正交实验,得到蛹虫草液体发酵最佳培养基为:蔗糖2.0％,蛋白胨0.8％,KH2PO40.5％,MgSO40.25％。最佳发酵条件为:种龄为120h(五天),接种量为10％,发酵液初始pH自然,装液量为200ml/500ml,摇床转速为130 r/min,培养温度为24℃;在最佳发酵培养基和发酵条件下,得到最大菌丝生物量为13.9g/L,多糖量为46.8mg/g。
　　4.对蛹虫草固体发酵生产子实体的碳源、氮源和料液比进行了单因素实验,得到最佳碳源为麦仁,最佳氮源为蚕蛹粉,最佳料液比为1:1.2;对蛹虫草出草期子实体的光温条件进行了优化,得到适宜子实体生长的温度为24℃。光照是蛹虫草生长子实体的必要条件,实验得到合适的光照时间是每天16小时以上。
　　5.对人工培养的蛹虫草子实体中虫草素的浸提工艺进行了优化。虫草素的检测方法选用毛细管电泳法。对浸提液、料液比、浸提温度和浸提时间进行了单因素实验和正交实验,得到虫草素最佳提取液为60％乙醇、料液比为1:20、浸提温度为70℃、浸提时间为9h。

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第1章 绪论

1.1前言

1.2冬虫夏草生活史[5-9]

1.3 冬虫夏草人工培养研究概况

1.4 蛹虫草主要活性物质及其药理作用

1.5研究目的与内容

第2章 菌种筛选及保藏

2.1 引言

2.2实验材料

2.3 菌种筛选方法

2.4实验方法

2.5结果与讨论

2.6 本章小结

第3章 蛹虫草液体发酵工艺优化

3.1 前言

3.2 实验材料

3.3 分析测定方法

3.4 实验方法

3.5 结果与讨论

3.6 本章小结

第4章 蛹虫草固体发酵工艺优化

4.1 前言

4.2 实验材料

4.3 蛹虫草子实体培养方法

4.4 实验方法

4.5 结果与讨论

4.6 本章小结

第5章 蛹虫草子实体中虫草素的提取研究

5.1 前言

5.2 实验材料

5.3 分析测定方法

5.4实验方法

5.5 实验结果与分析

5.8 本章小结

第6章 结论与展望

6.1 结论

6.2 展望

参考文献

致谢

在学期间主要科研成果