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引言
第一章文献综述
1.1几丁质酶研究进展
1.1.1几丁质酶概述
1.1.2木霉几丁质酶研究进展
1.2植物转化方法
1.2.1农杆菌转化法
1.3转基因番茄研究进展
1.3.1转基因抗病番茄的研究
1.3.2番茄抗虫基因工程
1.3.3番茄抗除草剂工程
1.3.4番茄抗逆基因工程
1.4内含子与植物基因工程
1.5转基因植物基因沉默及预防策略
1.6番茄基因工程展望
1.7本研究的目的和意义
技术路线
第二章几丁质酶基因的克隆及植物表达载体的构建
2.1材料与方法
2.1.1菌株与质粒
2.1.2酶和试剂
2.1.3培养基及培养条件
2.1.4菌种保藏技术
2.1.5几丁质酶基因的克隆
2.1.6植物表达载体pCHI1302-42的构建
2.1.7农杆菌的冻融法转化
2.2结果与分析
2.2.1绿色木霉LTR-2 42kDa几丁质酶基因的克隆
2.2.2重组质粒pMChi42限制性内切酶酶切分析
2.2.3重组质粒pMChi42所携带的外源片段的核苷酸全序列测定
2.2.4 42kDa几丁质酶基因及其所编码蛋白的性质分析
2.2.5 pCHI1302-42的构建方案
2.2.6根癌农杆菌LBA4404转化菌株筛选
2.3讨论
第三章利用42kDa几丁质酶编码基因转化番茄
3.1材料和方法
3.1.1实验材料
3.1.2主要药品及试剂
3.1.3根癌农杆菌培养基
3.1.4植物组织培养培养基配制
3.1.5实验方法
3.1.6再生植株的分子检测
3.2实验结果与分析
3.2.1激素对愈伤组织诱导的影响
3.2.2转基因植株的获得
3.2.3植物基因组DNA
3.2.4再生植株PCR检测
3.2.5再生植株Southern blotting检测
3.3讨论
第四章讨论与结论
4.1讨论
4.2结论
参考文献
致谢