β-防御素和鲑鱼生长激素对大菱鲆生长及免疫力的影响研究

摘要

抗菌肽(Anti-microbialpeptides)是广泛存在于生物界中具有抗菌活性的一类短肽，在机体抵抗病原入侵方面起着重要的作用。β-防御素作为抗菌肽的一种，同样具有免疫防御功能。本文选择酵母β-防御素、β-防御素及鲑鱼生长激素作为饲料添加剂，饲喂大菱鲆，测定其对大菱鲆生长（平均体重、平均体重增长率、特定生长率）及免疫力（血细胞数、溶菌酶活力、替代途径补体活力、超氧化物歧化酶活力、相对免疫保护率）的影响，得到以下研究结果:
　　 1.酵母β-防御素对大菱鲆生长及免疫力的影响:以初始体重为20±19的大菱鲆为研究对象，采用单因子实验设计，在基础饲料中分别添加2.5、10、40ml/kg的酵母β-防御素，在室内循环系统中进行为期8周的生长实验，养殖系统水温保持在18℃，盐度为31-33‰，pH7.8-8.2，溶解氧不低于6mg/L。实验过程中每2周取样一次，测定大菱鲆的平均体重、血细胞数、溶菌酶活力、替代途径补体活力和超氧化物歧化酶活力，实验结束时用鳗弧菌对各处理组进行攻毒实验。结果表明，(1)酵母β-防御素对大菱鲆生长的影响:投喂添加不同浓度的酵母β-防御素饲料的各实验组大菱鲆平均体重均显著高于对照组（P＜0.05），而各实验组之间无显著差异（P＞0.05），特定生长率表明酵母β-防御素主要在实验14d之前对大菱鲆起促生长作用（P＜0.05），而14d之后作用不明显（P＞0.05）。(2)酵母β-防御素对大菱鲆免疫力的影响:投喂添加不同浓度的酵母β-防御素饲料的各实验组，血细胞数量在各个时期均高于对照组，但差异不显著（P＞0.05）。添加酵母β-防御素的各实验组对大菱鲆溶菌酶活力均有显著提高作用（P＜0.05），随着时间的延长，低浓度组（2.5ml/kg组）和高浓度组（40ml/kg组）溶菌酶活力下降，至56天时2.5ml/kg组和40ml/kg组溶菌酶活力均低于10ml/kg组。添加10ml/kg和40ml/kg酵母β-防御素组的大菱鲆替代途径补体活力显著高于对照组(P＜0.05)，随着时间的延长，10ml/kg组大菱鲆替代途径补体活力高于40ml/kg组，但差异不显著（P＞0.05）。各处理组在大菱鲆养殖过程中超氧化物歧化酶(SOD)无明显变化，各组之间也差异不显著（P＞0.05）。(3)攻毒实验显示投喂添加10ml/kg酵母β-防御素饲料的实验组大菱鲆的累积死亡率显著低于对照组和2.5ml/kg组（P＜0.05），也低于40ml/kg组，但差异不显著（P＞0.05），同时10ml/kg组相对免疫保护率高于2.5ml/kg组和40ml/kg组。
　　 2.β-防御素对大菱鲆生长及免疫力的影响:以初始体重为30±19的大菱鲆为研究对象，采用单因子实验设计，在基础饲料中分别添加2.5、10、40ml/kg的β-防御素，在室内循环系统中进行为期8周的生长实验，养殖系统水温保持在18℃，盐度为31-33‰，pH7.8-8.2，溶解氧不低于6mg/L。实验过程中每2周取样一次，测定大菱鲆的平均体重、血细胞数、溶菌酶活力、替代途径补体活力和超氧化物歧化酶活力，实验结束时用鳗弧菌对各处理组进行攻毒实验。结果表明，(1)β-防御素对大菱鲆生长的影响:添加β-防御素的实验组的大菱鲆平均体重均显著高于对照组（P＜0.05），但各实验组之间无显著差异（P＞0.05），特定生长率结果显示可以看出酵母β-防御素主要在前14天时和28天至42天之间对大菱鲆起促生长作用（P＜0.05），而其他时间段作用不明显（P＞0.05）。(2)β-防御素对大菱鲆免疫力的影响:投喂添加不同浓度的β-防御素饲料的各实验组，血细胞数量在各个时期均与对照组差异不显著（P＞0.05），而对大菱鲆溶菌酶活力均有显著提高作用（P＜0.05），而且高浓度组（40ml/kg组）溶菌酶活力在实验前期显著高于低浓度组（2.5ml/kg组）和中浓度组（10ml/kg组）（P＜0.05），随着养殖时间的延长，10ml/kg组溶菌酶活力逐渐升高，至56天时10ml/kg组和40ml/kg组之间溶菌酶活力无显著差异（P＞0.05）。添加10ml/kg和40ml/kgβ-防御素组的大菱鲆替代途径补体活力显著高于对照组（P＜0.05），而两者之间差异不显著（P＞0.05）。各处理组在大菱鲆养殖过程中超氧化物歧化酶(SOD)无明显变化，各组之间也差异不显著（P＞0.05）。(3)攻毒实验显示投喂添加10ml/kg和40ml/kgβ-防御素饲料的实验组大菱鲆的累积死亡率显著低于对照组和2.5ml/kg组（P＜0.05）。同时10ml/kg组和40ml/kg组相对免疫保护率高于2.5ml/kg组。
　　 3.鲑鱼生长激素对大菱鲆生长及免疫力的影响:以初始体重为5±0.5g的大菱鲆为研究对象，采用单因子实验设计，在基础饲料中分别添加1、2、3g/kg的鲑鱼生长激素，在室内循环系统中进行为期8周的生长实验，养殖系统水温保持在18℃，盐度为31-33‰，pH7.8-8.2，溶解氧不低于6mg/L。实验过程中每2周取样一次，测定大菱鲆的平均体重、血细胞数、溶菌酶活力、替代途径补体活力和超氧化物歧化酶活力，实验结束时用鳗弧菌对各处理组进行攻毒实验。结果表明，(1)鲑鱼生长激素对大菱鲆生长的影响:添加2g/kg和3g/kg鲑鱼生长激素的实验组平均体重显著高于对照组和1g/kg组（P＜0.05），至42天时，2g/kg组大菱鲆平均体重及平均体重增长率均高于3g/kg组，但差异不显著（P＞0.05）。(2)鲑鱼生长激素对大菱鲆免疫力的影响:投喂添加不同浓度的鲑鱼生长激素饲料的各实验组，血细胞数量在各个时期均与对照组差异不显著(P＞0.05)，而大菱鲆溶菌酶活力均显著降低（P＜0.05），随着养殖时间的延长，各组溶菌酶活力逐步接近，无显著差异（P＞0.05）。添加3g/kg鲑鱼生长激素组的大菱鲆替代途径补体活力显著高于对照组（P＜0.05），而1g/kg组和2g/kg两者与对照组之间差异不显著（P＞0.05），随着养殖时间的延长，各组间大菱鲆替代途径补体活力趋于接近，至56天时，各组间无显著差异（P＞0.05）。各处理组在大菱鲆养殖过程中超氧化物歧化酶(SOD)无明显变化，各组之间也差异不显著（P＞0.05）。(3)攻毒实验显示投喂添加鲑鱼生长激素饲料的各实验组大菱鲆的累积死亡率显著低于对照组（P＜0.05），但各实验组之际差异不显著（P＞0.05），同时对大菱鲆相对免疫保护率均有不同程度的提高作用。
　　 4.β-防御素对水产主要病原菌抑菌作用的研究:以β-防御素为研究对象，采用试管两倍稀释法，研究β-防御素对水产主要病原菌的抑菌作用，经测定β-防御素对大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、鳗弧菌、溶藻胶弧菌、副溶血弧菌最低抑菌浓度(MIC)分别为4μg/ml、4μg/ml、4μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、8μg/ml;最低杀菌浓度(MBC)分别为8μg/ml、8μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、8μg/ml、8μg/ml。

目录

摘要

缩略词(Abbreviation)

引言

第一章 文献综述

1 研究背景

2 国内外研究进展

第二章 酵母β-防御素对大菱鲆生长及免疫力的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 大菱鲆平均体重、平均体重增长率及特定生长率的测定

2．2 大菱鲆免疫指标的测定

2．3 攻毒实验

3 讨论

3．1 酵母β-防御素对大菱鲆平均体重、平均体重增长率及特定生长率的影响

3．2 酵母β-防御素对大菱鲆的免疫力的影响

第三章 β-防御素对大菱鲆生长及免疫力的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 大菱鲆平均体重、平均体重增长率及特定生长率的测定

2．2 大菱鲆免疫指标的测定

2．3 攻毒实验

3 讨论

3．1 β-防御素对大菱鲆平均体重、平均体重增长率及特定生长率的影响

3．2 β-防御素对大菱鲆免疫指标的影响

第四章 鲑鱼生长激素对大菱鲆生长及免疫力的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 大菱鲆平均体重、平均体重增长率及特定生长率的测定

2．2 大菱鲆免疫指标的测定

2．3 攻毒实验

3 讨论

3．1 鲑鱼生长激素对大菱鲆平均体重、平均体重增长率及特定生长率的影响

3．2 鲑鱼生长激素对大菱鲆免疫力的影响

第五章 β-防御素对水产主要病原菌抑菌作用的研究

1 材料和方法

1．1 药品

1．2 实验菌种及培养基

1．3 菌液浓度标准曲线绘制

1．4 菌液制备

1．5 最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)的测定

2 结果与分析

2．1 菌液浓度标准曲线

2．2 最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)的测定结果

3 讨论

3．1 β-防御素具有广谱的抗菌活性及耐药性

3．2 β-防御素抑菌活性的影响因素

3．3 β-防御素的其他生物活性

结论

参考文献

附录

致谢

导师组意见

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