牙鲆和石鲽血液指标测定、血细胞形态观察及核型分析

摘要

本试验以牙鲆和石鲽为研究对象，应用常规的血液学指标测定方法和血细胞涂片法，测定二者的血液学指标，并观察其血细胞形态;采用外周血细胞培养法制备染色体标本，经Giemsa染色、镜检、拍照后进行核型分析。研究结果如下:
　　 1.牙鲆的红细胞密度为(2.44±0.14)×106个/mm3;白细胞密度为(3.28±0.45)×104个/mm3;血红蛋白含量为(6.27±0.42)g/100mL;红细胞渗透脆性为(0.45±0.01)g％;沉降率为(5.73±0.25)mm/h。石鲽的红细胞密度为(2.84±0.26)×106个/mm3;白细胞密度为(5.30±0.14)×105个/mm3;血红蛋白含量为(6.44±0.15)g/100mL;红细胞渗透脆性为（0.45±0.05）g％;沉降率为(4.57±0.07)mm/h。
　　 2.采用外周血液进行涂片观察，在涂片上可区分出牙鲆和石鲽的红细胞和5种白细胞，他们分别是淋巴细胞、血栓细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞，未见嗜碱性粒细胞。其中淋巴细胞的体积最小，单核细胞的体积最大;在白细胞中，淋巴细胞数量最多，其次是血栓细胞，嗜酸性粒细胞的数量最少;此外还可见正在分裂的红细胞，说明红细胞可在外周血中直接分裂。
　　 3.采用外周血细胞培养法制备染色体标本，用RPMI1640全血培养基进行培养，从血液保存时间、刺激源PHA（植物血球凝集素）和ConA（刀豆蛋白A）等方面对外周血细胞的培养及其染色体制备条件进行探讨，建立较成熟的外周血淋巴细胞培养及染色体制备的方法。结果表明:血液在4℃保存3d后细胞仍可正常生长，ConA和PHA两种刺激源均能促进外周血细胞的分裂增殖，从血细胞形态和白细胞数目来看，以ConA为刺激源的作用效果好于以PHA为刺激源的作用效果，培养时间以72h最好。牙鲆血细胞在21℃，以终浓度为0.1mg/mL的ConA为刺激源培养72h，在结束培养前4h加入终浓度1.5μg/mL秋水仙素，低渗35min可获得较好的染色体分裂相。石鲽血细胞在16℃，以终浓度为0.1mg/mL的ConA为刺激源培养72h，在结束培养前4h加入终浓度0.6μg/mL秋水仙素，低渗35min可获得较好的染色体分裂相。
　　 4.核型分析结果表明:牙鲆和石鲽的染色体核型均为2n=48，48t，即24对染色体均为端着丝粒染色体，臂数为NF=48，未发现多倍体现象，也未发现性染色体和随体。

目录

摘要

英文缩略对照表

引言

第一章 文献综述

1．鱼类血液指标和血细胞的研究进展

1．1 鱼类血液指标的研究进展

1．2 鱼类血细胞的研究进展

2．鱼类染色体的研究进展

2．1 鱼类染色体制备方法的研究进展

2．2 鱼类染色体核型的研究进展

第二章 血液指标测定及血细胞特点

1 试验材料

1．1 试验动物

1．2 试验仪器

1．3 主要试剂及溶液配制

2 试验方法

2．1 红细胞沉降速率的测定

2．2 血红蛋白含量的测定

2．3 红细胞渗透脆性的测定

2．4 血细胞计数

2．5 血细胞形态的观察

3 试验结果与分析

3．1 血液指标测定结果

3．2 血细胞形态

4 讨论

4．1 血液指标

4．2 血细胞的组成与形态

4．3 采血的影响

第三章 染色体核型分析

1 试验材料

1．1 试验动物

1．2 试验仪器

1．3 主要试剂及溶液配制

2 试验方法

2．1 采血及保存

2．2 外周血细胞体外培养

2．3 外周血细胞培养制备染色体标本

2．4 核型分析

3 试验结果与分析

3．1 血液保存时间

3．2 血细胞培养时间

3．3 PHA和ConA两种刺激源的作用

3．4 外周血细胞培养制备染色体标本的条件

3．5 染色体核型分析

4 讨论

4．1 血液保存时间

4．2 血细胞培养温度

4．3 PHA和ConA两种刺激源的作用

4．4 染色体标本的制备

4．5 染色体核型

结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的论文

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