三叶木通化学成分及生物活性研究

摘要

三叶木通Akebia trifoliate(Thunb.)Koidz为木通科木通属藤本植物，是2015版《中国药典》收载品种木通的基源植物之一，干燥藤茎入药，具有利尿通淋、通经下乳、清心除烦、抗氧化防衰老等功效。临床上以其良好的利尿作用，广泛的用于治疗淋症、心烦尿赤、水肿、湿热痹痛等。然而其发挥利尿作用的活性部位及成分尚不明确。本课题以天然产物化学结合药理实验的方法，拟寻找三叶木通的利尿活性部位及成分，同时对其抗氧化成分进行了研究。
　　三叶木通药材粗粉（4.9kg），以95％乙醇常温浸提6次，每次浸泡48小时，合并提取液，减压浓缩得到提取物浸膏280.6g。将浸膏悬浮于水中依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，减压回收溶剂。得到石油醚萃取物36.8g(13.1%)，乙酸乙酯萃取物29.7g(10.6%)，正丁醇萃取物137.7g(49.1%)，以及剩余水溶性部分70.6g(25.2%)。
　　采用大鼠代谢笼法对三叶木通藤茎提取物的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物和剩余水溶性部分的利尿活性进行测试。采用硅胶柱色谱及凝胶柱色谱等方法，对利尿作用显著的正丁醇部位（P<0.01）进行分离纯化，共得到8个化合物。通过NMR、HRMS等方法，结合文献数据鉴定化合物结构，分别为常春藤皂苷元（1）、丁香酸-4-O-α-L-鼠李吡喃糖苷（2）、β-谷甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷（3）、香草酸葡萄糖苷（4）、丁香酸葡萄糖苷（5）、甘露醇（6）、常春藤皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷（7）、肌醇（8）。其中化合物2、4、5为首次从木通属植物中分离得到。实验进一步对所分离得到的各化合物进行利尿活性测试，结果表明：与生理盐水对照组相比，甘露醇（P<0.05）、常春藤皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷（P<0.05）及常春藤皂苷元（P<0.05）的利尿活性显著。
　　采用DPPH自由基清除法，首次对三叶木通乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物以及水溶性部分进行抗氧化活性筛选。采用多种色谱技术，对抗氧化活性较强的乙酸乙酯萃取物进行化合物分离，共得到9个化合物。根据各化合物的理化性质及核磁数据等解析其结构，分别为β-谷甾醇（9）、香草酸（10）、6,7,10-三羟基-8-十八烯酸（11）、齐墩果酸（12）、2,6-二甲氧基-1,4-苯醌（13）、三十四烷（14）、秦皮乙素（15）、咖啡酸（16）、木通苯乙醇苷B（17）。其中化合物10、13、14为首次从木通属植物中分离得到。对各化合物的抗氧化活性进行测定，结果表明：咖啡酸（IC50=14.939μg.mL-1）和秦皮乙素（IC50=15.631μg.mL-1）对DPPH自由基的清除能力较强，与阳性对照抗坏血酸（IC50=17.269μg.mL-1）相当，是三叶木通具有抗氧化作用的物质基础。

目录

1 绪论

1.1 引言

1.2 三叶木通的生物学特征

1.3 木通属植物研究概况

1.3.1 木通属植物分类

1.3.2 木通属植物的化学成分

1.3.3 木通属植物的生物活性

1.4 选题的目的及意义

2 三叶木通化学成分的提取及初步分离

2.1 材料与方法

2.1.1 植物材料

2.1.2 实验试剂

2.1.3 实验仪器

2.1.4 三叶木通化学成分的提取

2.1.5三叶木通化学成分初步分离

2.2 结果与讨论

2.3 小结

3 三叶木通利尿活性部位及成分的研究

3.1 材料与方法

3.1.1 实验动物

3.1.2 实验试剂

3.1.3 实验仪器

3.1.4 三叶木通利尿活性部位的筛选

3.1.5 三叶木通利尿活性部位化学成分的研究

3.1.6 各单体化合物的利尿活性研究

3.2 结果与讨论

3.2.1 三叶木通各萃取物的利尿活性

3.2.2 利尿活性部位的化学成分

3.2.3 各化合物的利尿活性

3.3 小结

4 三叶木通抗氧化活性部位及成分的研究

4.1 材料与方法

4.1.1 实验试剂

4.1.2 实验仪器

4.1.3 三叶木通抗氧化活性部位的筛选

4.1.4 三叶木通抗氧化活性部位化学成分的研究

4.1.5 各单体化合物的抗氧化活性研究

4.2 结果与讨论

4.2.1 三叶木通各萃取物的抗氧化活性

4.2.2 抗氧化活性部位的化学成分

4.2.3 各化合物的抗氧化活性

4.3 小结

5 结 论

致谢

参考文献

附录：化合物波谱图

攻读硕士期间发表的论文目录

声明