一种新的抑癌候选基因的克隆及其功能的初步研究

摘要

该文研究采用锚定引物PCR法从正常人脑cDNA中克隆到一个含有酰基携带蛋白(ACP)结 构域的新基因.该克隆具有完整读枢区,全长为2.2kb目前已经获得5'端1183bp.该基因编 码一个含有357个氨基酸残基的蛋白质,分子量约40kD,故命名为p40.在用正常脑组织和胶质瘤组织减杂交时发现编码p40的基因属于一种在正常脑组织高表达,胶质瘤组织低表达(或不表达),而胶质瘤细胞系(BT325)不表达的差异表达基因.其后,组织原位杂交和免疫组化研究又进一步证实了这一发现.为深入研究p40基因的功能,研究者首先利用原核细胞获得 了该基因的表达产物,并利用该表达产物免疫家兔,获得了抗p40蛋白的多克隆抗血清,为 该基因的功能研究奠定了基础.利用哺乳动物细胞表达载体在真核细胞内得到了该基因的过表达.结果表明,p40基因很可能是一种拳的抑癌基因.亟待对其功能机制进行系统的研究 .

目录

英文缩写词表

前 言

文献回顾

一.抑癌基因研究进展

二.克隆新基因的几种常用方法

第一部分一种含有ACP样结构域新基因(p40)的发现

第二部分消减杂交法克隆胶质瘤相关基因和抑癌基因

第三部分抑癌候选基因p40功能的初步研究

实验一p40基因在大肠杆菌内的表达及初步纯化

实验二抗P40蛋白多克隆抗血清的制备及应用

实验三p40基因表达的组织分布特点

实验四P40基因在NIH/3T3细胞内与GFP的融合表达

实验五p40基因在体外对几种细胞的作用

实验六Southern杂交检测小鼠的p40同源基因

讨论

小结

致谢

参考文献