肿瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性CTL表位的预测及鉴定

摘要

全文分为以下三个部分:第一部分:表位预测目的 预测MAGE-n抗原的一般生物学特性及HLA-A2限制性CTL表位.方法 用SYFPEITHI超基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法,筛选新的MAGE-n抗原HLA-A2限制性CTL表位作为侯选表位.应用ANTHEPROTV5.0软件预测MAGE-n编码蛋白的一般生物学特性.结论SYFPEITHI超基序法和量化基序多项式法结合的预测方法可提高表位预测的效率及准确性.第二部分:预测表位的免疫学特性，目的用表位重建技术、ELISPOT及特异性杀伤实验研究HLA-A2限制性CTL候选表位的结合力及免疫活性.方法 对预测的抗原表位进行固相合成,并用HPLC进行纯化,质谱法(MS)鉴定.侯选表位与HLA-A2位点的亲和力及结合稳定性用竞争结合抑制实验、T2结合稳定性实验及MHC-肽复合体稳定性实验测定.RT-PCR法检测HCC细胞系MAGE-n表达.脂质体转染法构建MAGE-n基因转染细胞系.应用ELISPOT技术检测抗原肽特异性释放IFN-γ的T细胞频数.从HLA-A2阳性健康志愿者外周血分离单个核细胞(PBMC),用T2细胞负载MAGE-n抗原肽反复刺激活化(每周1次,共4次)诱导抗原肽特异性CTL.乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定诱导CTL对表达MAGE-n的HLA-A2阳性HCC细胞的识别及杀伤效应.结论 该研究证实表位重建技术结合免疫学方法(ELISPOT,LDH细胞毒实验)可提高表位研究的效率和准确性.实验筛选出的MAGE-n抗原表位QLVFGIEVV可作为特异性免疫治疗的靶分子而应用于HLA-A2阳性肝癌患者免疫治疗.第三部分:荷人肝癌SCID小鼠抑瘤实验目的研究MAGE-n抗原表位QLVFGIEVV特异性CTL对荷人肝癌SCID小鼠的抑瘤作用.方法 用HHCC(HLA-A2<'+>,MAGEn<'+>细胞皮下接种建立SCID小鼠荷瘤模型.用T2细胞负载抗原肽QLVFGIEVV反复刺激活化从HLA-A2阳性健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)诱导抗原肽特异性CTL.动物随机分为3组,分别注射对照培养基(对照组)、CTL(预防组,于接种肝癌细胞前)和CTL(治疗组,于接种肝癌细胞后).CTL细胞分别由尾静脉及腹腔注射,每次输注2.5×l0<'7>.于接种肿瘤细胞42天测定SCID小鼠脾脏细胞人CD分型.观察各组成瘤率、生长速度、肿瘤体积及重量、肺及其他重要脏器的转移等指标.结论 MAGE-n抗原表位QLVFGIEVV诱导的CTL可在荷人肝癌SCID小鼠体内产生特异性免疫反应,有效杀伤肝癌细胞.

目录

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缩略词表

前言

文献回顾

实验仪器及材料

第一部分MAGE-n抗原HLA-A2限制性CTL表位的预测

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

第二部分MAGE-nHLA-A2限制性CTL表位鉴定

1.方法

2.结果

3.讨论

第三部分MAGE-N抗原肽导CTL抑制SCID鼠人肝癌移植生长实验

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

小结

参考文献

致谢

附录：博士研究期间发表论文情况