第一部分蓖麻毒素A链基因的克隆、表达及纯化;第二部分大鼠梗阻性黄疸对肠粘膜及肝、肾损害与UTI的防治作用研究

摘要

该实验首先从蓖麻豆中提总mRNA,将其反转录成cDNA,并通过计算机辅助自行设计引物,通过PCR扩增蓖麻毒素A链DNA,装入pcDNA3.1载体,筛选带有插段的阳性克隆,进行目的的基因DNA序列分析.经序列测定,证实基因正确无误.再将测序正确的ricinA基因亚克隆入大肠杆菌融合表达载体pRSETA中,经酶切鉴定后将重组表达载体命名为pRSET A-ricinA.将pRSET A-ricinA转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导pRSET A-ricinA的表达.SDS-PAGE结果表明,出现了可溶性的表达产物.以镍金属螯合柱纯化目的蛋白,并采用四唑盐比色试验(MTT法)研究了其对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤活性.实验结果表明,表达产物有一定的细胞杀伤毒性.蓖麻毒素A链蛋白作为一种生物弹头,在特异的细胞杀伤中有很好的应用前景.可以和各种特异的抗体结合,对细胞进行杀伤.该文克隆表达了蓖麻毒素A链蛋白,为以后的实验奠定了基础.

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第一部分蓖麻毒素A链基因的克隆、表达及纯化

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摘要

文献回顾

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分大鼠梗阻性黄疸对肠粘膜及肝、肾损害与UTI的防治作用研究

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材料和方法

结果

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