磷脂酰肌醇-3激酶信号转导通路对缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞增生和VEGF表达的影响

摘要

本文研究目的：观察磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol-3Kinase，PI3K)信号转导通路对缺氧诱导的RPE细胞增生和VEGF表达的影响。 研究方法：在含有200μMCoCl2的培养液内分别培养人RPE细胞0、1、4、8、12和24h，建立人RPE细胞胞内化学缺氧模型。RT-PCR、Westernblot和细胞免疫荧光染色法检测缺氧不同时间PI3K的表达；30μmol/LLY294002加入人RPE细胞培养液，在缺氧状态下分别培养1、8、12和24h，用酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbantassay,ELISA)检测PI3K信号通路阻断前后缺氧组培养RPE细胞上清液中VEGF的含量；同时用流式细胞仪(flowcytometry，FCM)检测PI3K信号通路阻断前后缺氧RPE细胞的增生指数。 研究结果：CoCl2所致缺氧前后培养的人RPE细胞均有PI3KmRNA和蛋白的表达，在实验观察期内，随缺氧时间延长，PI3KmRNA和蛋白表达水平逐渐增高；细胞免疫荧光法检测显示，缺氧刺激1、4、8、12和24h，RPE细胞膜上PI3K磷酸化水平逐渐增高(P＜0.05)；ELISA检测证实，随缺氧时间延长，RPE细胞上清液中VEGF含量逐渐增加(P＜0.05)，而LY294002处理组RPE细胞VEGF含量显著低于对照组(P＜0.05)；FCM检测显示，RPE细胞增生活性随缺时间延长逐渐增高，LY294002处理组RPE细胞增生活性明显低于对照组(P＜0.05)。 研究结论：缺氧诱导的RPE细胞VEGF高表达和RPE细胞增生，可能部分是通过PI3K信号转导通路实现的。

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前 言

文献回顾

0引言

1主要材料、试剂和仪器

2实验方法

3结果

4 讨论

小 结

参考文献

个人简历及研究成果

志 谢