多奈哌齐拮抗β淀粉样蛋白抑制海马神经元烟碱乙酰胆碱β2受体表达的作用

摘要

阿尔茨海默病(Alzheimer'sDisease，AD)是发生于老年人群的一种原发性退行性脑病，大于65岁人群的发病率为5％-10％，其确切病因迄今不明。对其发病机制曾先后提出有β淀粉样蛋白学说、胆碱能学说及基因学说等假说，其中β淀粉样蛋白学说日益受到较多学者的认同。AD患者脑内主要病理表现为弥漫性大脑皮质萎缩，大量神经细胞变性丧失，以基底前脑和海马新皮层胆碱能神经元最严重，神经组织内可见许多老年斑和神经原纤维缠结。β淀粉样蛋白(amyloidbetaprotein，Aβ)是构成老年斑的主要成分，其中Aβ25-35是活性片段。烟碱乙酰胆碱受体(nicotinicacetylcholinereceptor,nAChRs)属于一个配体门控通道家族，研究发现nAChRs与脑内许多重要功能相关，包括认知和记忆功能。在AD的尸检及体外实验研究中有nAChRs减少的现象。盐酸多奈哌齐是近年来应用于临床的一种新型可逆性胆碱酯酶抑制剂，用于治疗轻中度AD，国内外报道其具有一定疗效。研究发现：多奈哌齐药理作用复杂多样，除抑制胆碱酯酶作用外，还可能具有减轻自由基损伤、改善脑血流量、拮抗脑内N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体等作用，在体外实验中发现它也可能作为nAChRs的变构调节剂，可能以某种途径直接作用于nAChRs而实施它的神经保护作用。本实验观察多奈哌齐对Aβ损伤神经元beta2烟碱型乙酰胆碱受体(Beta2nicotinicacetylcholinereceptor,β2-nAChR)表达的变化。以期为临床上治疗AD寻找新的药物靶点提供一些实验依据。 目的：观察Aβ25-35对海马神经元的损伤，及神经元上烟碱型乙酰胆碱受体β2亚单位表达的变化，并观察用多奈哌齐预处理对上述变化的影响。 方法：第一部分：用不同浓度(1、5、10、20μmol/L)的Aβ25-35诱导原代培养的海马神经元损伤，用倒置显微镜及MTT法观察神经元形态及存活的变化；用免疫荧光法观察神经元上标记的β2-nAChR的表达的变化，并用激光扫描共聚焦显微镜进行半定量。 第二部分：不同浓度及不同时间多奈哌齐提前干预培养的海马神经元，之后用Aβ25-35诱导神经元损伤。通过倒置显微镜观察神经元的形态学改变，用MTT法测量神经元的活性的变化。用免疫荧光法观察不同浓度和不同时间的多奈哌齐干预后Aβ25-35损伤神经元上β2-nAChR表达的情况，并用免疫荧光化学结合激光扫描共聚焦显微镜半定量法测量神经元上β2-nAChR平均荧光强度的变化。 结果：实验的第一部分：Aβ25-35诱导原代培养的海马神经元损伤的保护作用及神经元上β2-nAChR的表达。结果发现：各处理组的神经元形态上有不同程度地受损表现；各处理组的A值较对照组减小，神经元上标记的β2-nAChR的平均荧光强度较对照组减小，且随Aβ25-35浓度增大有变小趋势。 实验的第二部分：观察多奈哌齐预处理对Aβ25-35诱导原代培养的海马神经元损伤的保护作用及神经元上β2-nAChR的表达。结果发现：提前用不同浓度的多奈哌齐干预能够减轻Aβ25-35对神经元的损伤。免疫荧光化学法表明多奈哌齐预处理组的神经元上β2-nAChR表达明显增加，结合激光扫描共聚焦半定量法表明不同浓度和不同时间的多奈哌齐预处理组的β2-nAChR平均荧光强度明显高于Aβ25-35组。 结论：1.Aβ25-35可引起海马神经元活力受损，与浓度相关；用不同浓度的多奈哌齐预处理可减轻神经元的损伤， 2.Aβ25-35减少海马神经元上β2-nAChR的表达；Aβ25-35浓度越高，β2-nAChR表达量越少；而用多奈哌齐预处理可上调神经元上的β2-nAChR的表达； 3.不同浓度，不同时间的多奈哌齐预处理神经元可引起神经元上的β2-nAChR的上调，且与提前干预时间长短明显相关； 4.多奈哌齐对Aβ25-35诱导损伤的神经元的保护作用可能与β2-nAChR的上调有关。

目录

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缩略语表

前言

文献回顾

实验一Aβ抑制海马神经元上烟碱乙酰胆碱受体β2亚型的表达

实验二多奈哌齐上调Aβ损伤的神经元上烟碱乙酰胆碱受体的表达

小结

附图

参考文献

个人简历和研究成果及发表文章（第一作者）

致谢