安迪粉针剂的制备工艺及其抗白血病作用研究

摘要

白血病是起源于造血或淋巴干细胞的恶性疾病，由于干细胞的受损致使克隆中的白血病细胞停滞于细胞发育的不同阶段，是造血系统常见的一种恶性肿瘤，归属于中医“急劳”“温毒”“血证”“痰毒肿核”等范畴。白血病属顽疾之类，古代医家认为对顽病痼疾当“以毒攻毒”（《医学问答》）。蟾酥为有毒中药，以蟾酥治病符合“以毒攻毒”原则。本课题选择蟾酥单味药，按照中医理论和现代医药研究手段，研究安迪粉针剂的制备工艺及其体外药效学，旨在研发服用方便、疗效确切的治疗新药。 实验目的 采用正交设计法优选安迪粉针剂提取工艺和制备工艺，以蟾酥中的酯蟾毒配基和华蟾酥毒基以及出膏率作为参考指标；采用不同的方法确立制备工艺；研究安迪粉针剂对人慢性髓性白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响，以及探讨其作用机制。 实验方法 1、优选蟾酥的提取工艺 以酯蟾毒配基和华蟾酥毒基的含量和出膏率为指标，分别考察其与料液比、提取时间、提取次数的关系，优选正交工艺。 2、考察安迪粉针剂的制备工艺 研究通过药物的溶解情况筛选出增溶剂，结合制剂的色泽、外观和澄明度，选出支持剂。 3、安迪粉针剂对白血病细胞K562的影响观察 安迪粉针剂对人白血病细胞K562 增殖、凋亡、细胞形态的影响。 采用台盼兰染色对细胞增殖的影响，MTT 法检测安迪粉针剂对细胞活力的影响；流式细胞仪分析安迪粉针剂对细胞周期和凋亡的影响；荧光显微镜和电镜下观察安迪粉针剂对细胞形态的影响。 实验结果 1、蟾酥的提取工艺 最佳工艺条件为A1B3C1，即乙醇体积分数70％，提取时间60min，溶剂量1∶20。精确称量蟾酥3份，每份1g按照最佳方案A1B3C1进行回流提取，综合评分平均值为97.8％。 2、安迪粉针剂的制备工艺 试验结果表明丙二醇做增溶剂，当每100mL提取液中加入20mL丙二醇溶液（即体积分数约为20％）时，即可使蟾酥提取物溶解。甘露醇作为支持剂，用量为200mg/支（即质量浓度为100g·L-1）。 3、安迪粉针剂对白血病细胞K562的影响 MTT法测得安迪粉针剂在(2.5～20.0)μg/mL浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖，并具有浓度依赖性，20.0μg/mL安迪粉针剂作用36 h的K562细胞株A值最低；流式细胞技术显示10.0μg/mL，20.0μg/mL安迪粉针剂处理组K562细胞的凋亡率分别为50.0％和39.0％，明显高于对照组的10.0％（P﹤0.05）；电镜下可见K562细胞呈典型凋亡样改变。 结论 1、蟾酥的提取工艺提取时间和溶剂量是影响蟾酥中脂溶性成分提取工艺的主要因素，采用用70％乙醇,料液比为1∶20 提取60min 得出提取效果最好。 2、安迪粉针剂的制备工艺试验证明安迪粉针剂的制备工艺可行，通过药物的溶解情况筛选出增溶剂丙二醇，结合制剂的色泽、外观和澄明度，确定支持剂甘露醇。 3、安迪粉针剂对白血病细胞K562 的影响安迪粉针剂能明显抑制K562细胞增殖，并具有显著促进细胞凋亡的作用。