水貂绿脓杆菌蜂胶佐剂二价灭活苗的研制

摘要

水貂绿脓杆菌（MinkP.aeruginosa）是水貂出血性肺炎、眼角膜炎的重要致病菌，每年可造成养殖场6％-54％的死亡率，严重危害水貂养殖业事业。疲劳运输、环境恶劣、营养不良等都会引发该病，由于其对抗生素不敏感且极易产生耐药性，造成病貂发病后根治困难。控制该病主要以预防为主，治疗为辅，但目前尚无可有效针对水貂绿脓杆菌的疫苗问世。
　　 本课题以山东各地貂场流行的致病绿脓菌株中筛选出两株优势菌株G型水貂绿脓杆菌诸城株(G-ZC株)与B型水貂绿脓杆菌荣成株（B-RC株）为菌种，以具有多种生物学特性及免疫增强作用的蜂胶为佐剂，开展绿脓杆菌蜂胶佐剂二价灭活苗的研制及免疫效果评价研究。进行绿脓杆菌G-ZC株、B-RC株的生化特性、培养特性、免疫原性及毒力研究，开展疫苗研制前、后的一系列检验（包括纯粹检验、无菌检验、物理性状检验、安全性检验等）及疫苗最佳保存条件及保质期研究，并用研制的绿脓杆菌蜂胶佐剂二价灭活苗免疫小鼠及水貂，通过测定免疫动物血清中的抗体水平高低进行免疫保护效果评价及免疫保护期研究。
　　 通过记录G-ZC株、B-RC株菌株在不同培养条件下的OD值并分别绘制生长曲线，进行G-ZC株、B-RC株的培养特性研究，结果获得了可有效增菌的改良培养基，用改良后的培养基对G-ZC株、B-RC株进行增菌培养，到达平台期时的菌浓度分别为6.97×1011CFU/mL、2.43×1012CFU/mL。以腹部皮下注射方式对健康易感小鼠及水貂进行绿脓杆菌攻毒试验，并以半数致死浓度(LC50)表示毒力大小，LC50由改良寇氏法计算，最后得出G-ZC菌株对小鼠的LC50为4.49×109，对水貂的LC50为1.73×107;B-RC菌株对小鼠的LC50为1.73×109，对水貂的LC50为6.41×107。用本试验研制的疫苗对水貂行一次单剂量接种、单剂量重复接种、一次超剂量接种，对疫苗的安全性进行检验，结果免疫部位均无炎症、无结节，免疫后水貂的精神状态、饮食、饮水、生长发育状况均正常，证实该疫苗安全性高、副作用小，吸收性好，不会引起动物免疫部位的炎症反应。
　　 免疫后30d对小鼠及水貂进行10LC50浓度的菌液攻毒，测得该疫苗对小鼠的免疫保护率为93.10％，对水貂达达5/5保护。对免疫后的水貂定期抽血，分离血清后以试管凝集法测定抗体效价，免疫后7d，即可在水貂体内普遍检出抗体，其平均抗体效价达1∶5.2，21d水貂体内抗体水平普遍达到最高，平均抗体效价为1∶24.8，免疫后60d水貂平均抗体效价仍可达到1∶19.2，结果证实该绿脓杆菌蜂胶佐剂二价灭活苗免疫原性好且免疫持久。

目录

声明

摘要

前言

文献综述

1 蜂胶疫苗的免疫机制研究

2 蜂胶作为动物疫苗佐剂的研究及应用

3 绿脓杆菌疫苗的研究及应用

4 水貂出血性肺炎疫苗的研究进展

5 主要研究内容

试验一 菌种的培育特性及毒力研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 菌种的生化特性研究

2．2 菌种的培养特性研究

2．3 活菌计数与纯粹检验

2．4 菌种毒力测定

3 讨论

试验二 水貂绿脓杆菌蜂胶佐剂二价灭活苗的制备及检验

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 灭活检验

2．2 菌苗制备

2．3 菌苗检验

2．4 菌苗的保存条件及保质期研究

3 讨论

试验三 水貂绿脓杆菌蜂胶佐剂二价灭活苗的效力及免疫原性研究

1 材料与方法

1．1．材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 对小鼠的免疫保护效力试验

2．2 对水貂的免疫保护试验

3 讨论

结论

参考文献

致谢

作者简历

攻读硕士期间的科研成果

附录

英文缩写词表