人卵巢癌耐药细胞株的放化疗交叉耐受性实验研究

摘要

卵巢癌是严重威胁妇女生命和健康的常见恶性肿瘤，其发病率在妇科恶性肿瘤中排第3位，死亡率位居首位。卵巢癌细胞对放、化疗不敏感或在治疗过程中产生耐药性或抗性是造成肿瘤复发、转移及死亡率居高不下的重要原因。因此研究卵巢癌放疗及化疗敏感性的相关机制,对提高疗效克服放射耐受、化疗耐药、延长患者生存期具有重要的理论及现实意义。
　　目前国内外主要集中于射线照射对肿瘤细胞化疗耐药的影响与化疗耐药对肿瘤放射敏感性的影响的研究，而关于肿瘤放化疗交叉耐受性的实验研究甚少。探讨有关卵巢癌细胞的放化疗交叉耐受性机理，尚未见文献报道。本研究以人卵巢癌细胞株A2780及其紫杉醇耐药株A2780/Taxol为研究对象，一方面比较分析人卵巢癌细胞株A2780及其紫杉醇耐药株A2780/Taxol的放射敏感性，观察肿瘤化疗耐药对卵巢癌细胞放射敏感性的影响；另一方面比较分析照射前后A2780/Taxol细胞和其亲代A2780细胞中耐药相关蛋白表达水平的改变，研究放疗对化疗耐药的影响。初步探讨人卵巢癌细胞株的放化疗交叉耐受性机理，从而为临床肿瘤对放化疗交叉耐受的逆转提供实验依据。
　　目的：
　　1.研究耐药A2780/Taxol细胞和其亲代A2780细胞对60Coγ射线的放射敏感性，观察紫杉醇耐药A2780/Taxol细胞是否具有对60Coγ射线的辐射耐受性，分析化疗耐药对放射敏感性的影响。
　　2.研究照射前后A2780/Taxol细胞和其亲代A2780细胞中耐药相关蛋白P-gp、MRP1、P53、PKC-α的表达水平改变，分析放射对化疗耐药性的影响。
　　3.初步探讨人卵巢癌细胞株的放化疗交叉耐受性机理。
　　方法
　　1MTT法检测细胞的药物敏感性，绘制细胞生长曲线，计算细胞倍增时间，并分析细胞放射敏感性。
　　2克隆形成实验分析细胞放射抗拒性。
　　3流式细胞术检测照射前后细胞凋亡率及细胞周期变化。
　　4Westernblot法检测照射前后P-gp、MRP1、P53、PKC-α蛋白的表达情况。
　　结果：
　　1.A2780/Taxol细胞的耐药指数为43.96(P<0.01)。
　　2.不同照射剂量处理后，耐药的A2780/Taxol细胞凋亡率均低于其亲本细胞A2780(P<0.05)；4Gy60Coγ射线照射后24～72hA2780细胞呈现G1期细胞阻滞和S期细胞比例下降,耐药的A2780/Taxol细胞则呈G1期细胞比例减少和S期细胞比例增加。
　　3.WesternBlot法检测照射前后P-gp、MRP1、P53、PKC-α蛋白的表达情况：
　　（1）A2780细胞：2Gy、4Gy、8Gy照射作用后,A2780细胞中P-gp蛋白、MRP1蛋白、PKC-α蛋白、P53蛋白的表达水平，均高于对照(0Gy)（P<0.05）。
　　（2）A2780/Taxol细胞：2Gy照射作用后，A2780/Taxol细胞中P-gp蛋白、PKC-α蛋白的表达水平高于对照(0Gy),（P<0.05）；2Gy、8Gy照射作用后，A2780/Taxol细胞中P53蛋白的表达水平，均高于对照(0Gy)（P<0.05）。
　　（3）比较A2780细胞和A2780/Taxol细胞中P-gp、MRP1、P53、PKC-α蛋白表达水平：在照射前及2Gy、4Gy、8Gy照射作用后，A2780/Taxol细胞中P-gp蛋白表达水平，均高于A2780细胞（P<0.01）；在照射前及8Gy照射作用后，A2780/Taxol细胞中MRP1蛋白表达水平，均高于A2780细胞（P<0.01）；在照射前及2Gy照射作用后，A2780/Taxol细胞中PKC-α蛋白表达水平，均高于A2780细胞（P<0.05）；照射前，A2780/Taxol细胞中P53蛋白表达水平高于A2780细胞（P<0.05）。
　　结论：
　　1.卵巢癌耐药细胞株A2780/Taxol表现出一定程度的辐射抗性，具有放化疗交叉耐受性。
　　2.放射线照射可以改变人卵巢癌细胞株A2780以及其耐药细胞株A2780/Taxol中耐药相关蛋白的表达水平，进一步诱导和增加卵巢癌细胞的耐药性。
　　3.放射线和药物诱导能加强卵巢癌耐药细胞株A2780/Taxol中P-gp蛋白、PKC-α蛋白过表达，可能是引起放化疗交叉耐受性的原因之一。

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前言

文献回顾

1.肿瘤的化疗耐药性

2. 肿瘤的放射敏感性

3. 肿瘤对化疗药物与电离辐射的交叉耐受性

正文

实验一 人卵巢癌细胞株A2780及其紫杉醇耐药细胞株 A2780/Taxol 生物学特性研究

1 引言

2 材料

3 方法

4 结果

实验二 人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株 A2780/Taxol的放射敏感性研究

1 引言

2 材料

3 方法

4 结果

实验三 人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株 A2780/Taxol的放化疗交叉耐受性机理研究

1 引言

2 材料

3 方法

4 结果

5 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢