二氢吡啶载体介导的脑靶向前药合成及其靶向性研究

摘要

二氢吡啶载体介导的脑靶向前药(Dihydropyridine carrier prodrug, DHPP)化学结构类似于烟酰胺腺嘌呤氢化二核苷(Nicotinamide adenine dinucleotide, NADH)(图1),能被NADH-NAD+氧化还原辅酶所识别并快速氧化成相应的吡啶季胺盐,由于该辅酶催化氧化还原系统在全身分布不一致,其中脑组织较外周循环系统少,故脑中的生成时间较血浆组织中缓慢。吡啶季胺盐的强亲水性特点使其在外周组织中被迅速清除,而脑中缓慢生成的吡啶鎓盐则难以通过BBB,被“封锁”于脑内,在水解酶的作用下缓慢水解释放出母药,同时裂解的小分子载体没有神经毒性,也可从脑内被清除。这种相对稳定的脑靶向递药系统可使母药缓慢释放并云集于脑内。流行病学调查和临床观察结果提示,应用雌激素替代疗法(ERT)可能有益于降低绝经后妇女AD的发生或延缓AD的进展,故雌激素也可能作为AD重要的辅助治疗药物。有证据表明雌激素可以提高胆碱能神经密度,与胆碱脂酶抑制剂(ChEI)合用具有协同作用,对绝经后女性AD患者的认知操作和痴呆严重程度的改善作用显著优于单用ChEI或ERT,ERT与ChEI联合应用可使中枢神经系统乙酰胆碱的浓度增加更为显著,因此两者合用的治疗策略引起了研究者们的关注。本课题主要研究内容如下:
　　1. DHPP合成方法研究选定临床上治疗阿尔茨海默氏症(Alzheimer’s disease, AD)一线药物他克林作为母药,碱处理将其氨基游离,通过与卤代乙酰氯反应生成卤乙酰化他克林,再以烟酸及其类似物为载体通过共价键连接成吡啶季胺盐,在碳酸氢钠和硫代硫酸钠(H2O/DCM)中将其还原成二氢吡啶载体介导的前体药物。经过MS、NMR进行化合物表征。
　　2.烟酰刺芒柄花素及3,5-吡啶二甲酰刺芒柄花素合成方法研究选定对AD有重要的辅助治疗作用的植物雌激素刺芒柄花素为母药。在DCC/DMAP缩合剂和吡啶作溶剂下将烟酸与刺芒柄花素缩合得到烟酰刺芒柄花素;在3,5-吡啶二甲酰氯和刺芒柄花素作用下得到3,5-吡啶二甲酰刺芒柄花素。MS、NMR进行化合物表征。
　　3.药物浓度测定的方法学考察取雌雄小鼠各10只,腹主动脉取血及各脏器,包括心、脑、肝、肺、肾,称量并用生理盐水2:1稀释后匀浆,配制(含内标地西泮)1.6μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、48μg/mL、64μg/mLL、72μg/mL、96μg/mL的THA标准溶液,处理提取。色谱条件为:C18柱(250mm×4.6mm);0.1M磷酸缓冲盐(PBS)(pH=6.1):乙腈(62:38);流速:1.0mL/min;柱温:37℃;进样量:20μL;进样时间:11min。HPLC测得工作曲线,脑:Y=179354X+383439, r2=0.997;血浆:Y=202854X+275920, r2=0.9975;肝: Y=192344X+403239, r2=0.99;心: Y=184554X+372999, r2=0.9980;肺: Y=189354X+372320,r2=0.9946;肾: Y=229364X+415239,r2=0.9945。质控样本低、中、高浓度精密度、回收率均达到要求,此方法符合要求。
　　4.血液及各组织中药物分布研究取雌雄小鼠各10只,i.g THA和前药,麻醉后腹部取血,并在冰上取脑、肝、肺、心、肾组织,称量并用生理盐水2:1稀释后匀浆;处理后精确吸取500μL血浆及各组织匀浆,加入内标物咖啡因,提取后HPLC进样。实验证明,脑部吡啶季胺盐的含量超过各组织器官和血液中的含量,前药释放也较母药平缓,预示着二氢吡啶载体介导的前体药物具有较好的缓释功能和脑靶向性,且易从外周清除。

目录

缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

正文

第一部分 化合物合成

1 材料

2 方法

第二部分 THA HPLC 检测方法学考察

1 材料

2 方法

第三部分 DHPP-1 靶向性研究

1 材料

2 方法

3 实验结果

讨论

小结

附图

参考文献

个人简历和研究成果

致谢