中国人群HIV-1 Gag区特异性CTL应答和免疫逃逸

摘要

获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS,艾滋病)是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染机体后主要侵犯CD4+ T细胞,导致机体免疫缺陷而继发各种机会性感染或肿瘤所致。目前AIDS已经成为严重危害人类健康的传染病之一,甚至在有些国家开始影响社会稳定。虽然高效抗逆转录病毒疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)是治疗AIDS最有效的手段,但是HAART治疗不能完全清除HIV病毒,所以研发HIV疫苗来控制HIV传播或治疗AIDS才是终极目标。有充分的证据表明HIV-1 Gag特异性CTL应答在控制HIV-1复制中发挥了非常重要作用。HIV-1 Gag区变异是导致病毒免疫逃逸的重要原因。本研究建立了107例中国HIV-1感染者的研究队列,研究HIV-1B Gag特异性CTL应答和免疫逃逸。用合成的HIV-1B亚型Gag区肽段在体外诱导CTL应答,分析HIV-1B Gag区特异性CTL应答特征。对研究对象携带的HLA等位基因进行高分辨率分型,根据Los Alamos数据库确定其限制的最优表位。确定携带限制最优表位等位基因部分识别最优表位所在肽段的19名感染者,提取感染者体内HIV-1的RNA,确定AA序列,与合成的肽段比较AA的序列,分析变异与CTL应答或免疫逃逸的关系。主要研究结果如下:1、ELISpot检测107例HIV-1B Gag区特异性CTL应答发现:HIV-1B亚型Gag区的66条肽至少能被1名研究对象的CTL细胞识别,肽段被识别频率的中位数为10.28％。102例研究对象中最少能识别HIV-1B亚型Gag区的1条肽段。筛选出了应答频率和应答强度均处于前10的6条肽段:Gag-B-23,Gag-B-24,Gag-B-40,Gag-B-41,Gag-B-42,Gag-B-47。2、研究结果发现CD4+ T细胞计数与HIV-1B Gag区蛋白特异性CTL累计应答强度和应答频率都呈正相关(P<0.001)。分析发现病毒载量与HIV-1B Gag区蛋白特异性CTL累计应答强度和应答频率都呈负相关(P<0.005)。3、HLA高分辨率分型发现:107名研究对象中A位点的出现了32种等位基因,其中HLA-ⅠA*0201出现的频率最高,达到了32%。HLA-ⅠB位点有46种, HLA-ⅠB*4601,达到28%。HLA-ⅠC位点的等位基因出现24种,出现频率最高的是HLA-ⅠCw*0102,出现频率18.69%。4、107名研究对象中HLA-Ⅰ类等位基因中出现限制最优表位的等位基因134次。22名研究对象携带的等位基因不能限制HIV-1Gag区最优表位所在肽段产生CTL应答。研究对象携带的限制最优表位的等位基因数目和HIV-IB Gag区蛋白肽段CTL应答频率和累计应答强度分析发现它们没有直线相关关系。5、GAG-B-23肽段区域发生AA变异导致CTL应答逃逸的比例达到85.71%(6/7)。肽段变异主要有:F32Y、E35A、V36I、V36T、F40Y、E45T。GAG-B-23肽段区域发生变异未导致CTL应答逃逸也有14.28%。经过统计分析发现两者有统计学差异(Fisher’s Exact Test, P=0.026)。GAG-B-40和GAG-B-41肽段的变异有E159G、E159K、V165T、V165I、R167K、F168Y、L172T、R173K、A174G、S178A、E180A。用Fisher’s Exact Test分析GAG-B-40肽段和GAG-B-41共同含有的YR10变异导致HIV-1B病毒逃逸HIV-1B Gag区特异性CTL应答有统计学上的差异(P=0.029)。结果提示HIV-1B Gag区变异是导致病毒发生CTL免疫逃逸的重要原因。

目录

缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

实验一 HIV-18 GAG区特异性CTL应答特征研究

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4. 讨论

实验二 研究对象HLA-Ⅰ类等位基因分型及其限制肽段的CTL应答比较

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4. 讨论

实验三 HIV-18 GAG 区变异与免疫逃逸

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4. 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢