孕激素缓释微球的研制及其局部应用对子宫内膜异位症的治疗作用

摘要

研究背景:
　　子宫内膜异位症是一种难以治愈的常见妇科良性疾病，而妊娠是对子宫内膜异位症极为有效的自然疗法，假孕疗法就是用药物模拟妊娠的机体内环境，从而达到治疗目的。然而，全身应用孕激素的副作用多，包括恶心、痤疮、体重增加、水钠潴留、突破性出血、肝功能异常及血栓形成等。患者的依从性较差，常常半途而废，极大地影响了治疗效果。同时常规假孕疗法病灶局部的药物浓度低，对卵巢内膜异位囊肿等病变的治疗效果差。
　　为了提高疗效同时降低副作用，我们提出诱导局部假孕治疗子宫内膜异位症的假说。即制备一种可长期缓释孕激素的生物降解型微球，注射到子宫内膜异位症病灶局部，在病灶局部形成高浓度孕激素的环境，诱导出高度假孕状态，使异位内膜病灶萎缩、坏死并吸收，从而提高疗效；而血药浓度低，对代谢及卵巢功能影响小,可减少常规假孕疗法的副作用。
　　研究目的:
　　1.设计一种可注射并长期缓释孕激素的生物降解型微球；
　　2.通过自体移植子宫内膜建立兔及大鼠子宫内膜异位症动物模型；
　　3.在兔内异症模型上观察孕激素缓释微球局部应用的疗效与副作用；
　　4.在大鼠皮下内异症模型上观察单次局部注射孕激素缓释微球疗效的维持时间，并与GnRHa的疗效相比较。
　　研究方法与结果:
　　第一部分:孕激素缓释微球的制备及特性检测
　　采用油/水复乳液中蒸发法制备左炔诺孕酮聚乳酸微球，并检测了微球表面性状、粒径分布、注射性、载药率、体外释药及降解。通过优化含药量、蒸发温度和蒸发搅拌速度改善载药微球的表面性状、减少载药微球的突释效应。
　　含药量严重影响载药微球的表面性状，当分散相含药量在5％及以下时，载药微球表面相对光滑；而含药量在10％及以上时，载药微球的表面粗糙，有药物微晶体黏附，部分微球开裂；蒸发温度也对载药微球的表面性状有一定的影响，在常温下（25℃左右）制备的载药微球表面粗糙有裂纹，而在冰浴条件(0-4)℃下制备的载药微球表面相对光滑；蒸发搅拌速度是微球表面性状的另一影响因素，低速搅拌蒸发制备的载药微球表面光滑，但部分微球出现融合现象，中速搅拌蒸发制备的载药微球表面光滑，形状规则，无融合现象，而高速搅拌蒸发制备的载药微球表面粗糙，大小不一，形状不规则。体外释药曲线显示优化组合条件下制备的载药微球突释效应最小，释药最平稳，最接近零级释放。
　　扫描电镜显示优化组合条件下制备的载药微球表面非常光滑致密，无孔隙裂纹，粒径分布在45μm左右（45.18±8.96μm），适合18G-23G的针头注射，但对细于26G的针头不具备通针性。含药量在(37.5±1.4)％，经过6个月的体外降解，微球仅仅出现粘连和融合，但仍保持原有形状。
　　第二部分：子宫内膜异位症动物模型的建立
　　对45只雌性新西兰大白兔行开腹手术，切除左侧子宫并纵形剖开，剥除肌层及浆膜层，修整成0.5×0.5cm大小的组织，6-0丝线缝合至腹膜壁层，两个月后，内膜移植物从腹腔凸起并形成血管化的囊肿，动情周期未受影响，囊肿的组织与结构和人内膜异位囊肿相似。
　　对25只雌性SD大鼠行开腹手术，切除左侧子宫并纵形剖开，剥除肌层及浆膜层，修整成4块0.5×0.5cm大小的组织，放置在大鼠下腹部皮下，两个月后，皮下内膜移植物变成紫蓝色的囊肿，动情周期未受影响，囊肿的组织与结构和人内膜异位囊肿相似。
　　第三部分：孕激素缓释微球兔内膜异位囊肿内注射的药理药效学研究
　　将兔内膜异位模型随机化分为5组，分别接受局部假孕治疗（即将孕激素缓释微球注射到内膜异位囊肿内）、局部空白微球治疗（即将空白微球注射到内膜异位囊肿内）和系统假孕治疗（即反复皮下注射孕激素）。并设去势组作为阳性对照，空白对照组作为阴性对照。与系统假孕组相比，局部假孕组血药曲线平稳，血药浓度远远低于系统假孕组(P<0.01)，而囊肿内药物浓度远远高于系统假孕组(P<0.01)，一次给药可维持6个月。
　　治疗6个月后，对照组和空白微球组的内膜异位囊肿明显增大(P<0.01)，系统假孕组内膜异位囊肿无显著变化，而局部假孕组和去势组内膜异位囊肿显著减小(P<0.01)。系统假孕组内膜异位囊肿仅仅发生分泌性改变，而局部假孕组与去势组内膜异位囊肿发生高度萎缩。
　　同时，系统假孕组转氨酶、血脂、血糖和体重增加均显著升高，而局部假孕组对各代谢指标无明显影响。系统假孕组排卵受到抑制，无动情周期，而局部假孕组动情周期未受影响。
　　第四部分：孕激素缓释微球囊内单次注射对大鼠皮下内膜异位囊肿疗效的长期观察
　　将大鼠皮下内膜异位模型随机化分为3组，分别接受局部假孕治疗（即将孕激素缓释微球注射到内膜异位囊肿内）和6个月的GnRHa治疗，并设空白对照组。每月测量囊肿最大径变化，连续阴道涂片观察性周期变化。治疗后第6、12月取血样和内膜异位囊肿，观察代谢指标变化、囊肿组织学变化、雌/孕激素受体的表达变化。
　　治疗6个月后，局部假孕治疗和GnRHa治疗均引起内膜异位囊肿显著萎缩(P<0.01)。局部假孕组雌孕激素受体表达普遍减弱(P<0.01)；而GnRHa组雌激素受体表达普遍增强(P<0.01)，孕激素受体在上皮的表达也显著增强(P<0.01)。之后，局部假孕组囊肿仍保持萎缩状态，而GnRHa组囊肿在停药后快速增长，于第9月达到治疗前的水平并保持到第12月。局部假孕组雌/孕激素受体的表达在第12月仍低于对照组水平，而GnRHa组雌/孕激素受体的表达在第12月与对照组无显著差异。局部假孕治疗和GnRHa治疗对各代谢指标均无显著影响。局部假孕组动情周期正常，而GnRHa组在治疗后6至7个月无动情周期。
　　结论:
　　1.优化组合条件下制备的孕激素缓释微球表面性状最好，突释效应最小，最接近零级释放，在体外条件下一次给药可释药长达7个月，适合常规注射。
　　2.自体移植子宫内膜组织可成功建立兔及大鼠内异症动物模型，兔模型适合研究孕激素缓释微球局部应用的疗效和药物代谢特点；大鼠皮下模型适合研究孕激素缓释微球单次应用疗效的维持时间和局部作用的机制。
　　3.孕激素缓释微球局部应用后，病变局部药物浓度高，使内膜异位囊肿发生高度萎缩，治疗效果与去势相当，显著优于全身用药；而血药浓度低，无明显的毒副作用。
　　4.单次局部注射孕激素缓释微球对大鼠皮下内膜异位囊肿的治疗效果可维持近一年，同时无明显的毒副作用，因而可通过重复局部注射孕激素缓释微球预防子宫内膜异位症的复发。

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封面

声明

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缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

1.子宫内膜异位症的治疗现状

2.孕激素缓释微球

3.载药微球缓释系统

4.长效孕激素微球的设计

5.应用前景

正 文

实验一 孕激素缓释微球的制备及特性检测

1 材料和仪器

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 子宫内膜异位症动物模型的建立

1 材料和器械

2 方法

3 结果

4 讨论

实验三 孕激素缓释微球兔内膜异位囊肿内注射的药理药效学研究

1 材料与器械

2 方法

3 结果

4 讨论

实验四 孕激素缓释微球囊内单次注射对大鼠皮下内膜异位囊肿疗效的长期观察

1 材料与器械

2 方法

3 结果

4 讨论

结 论

参考文献

个人简历和研究成果

致谢